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微生物检测标准操作程序中菌种保存



录入时间:2014-2-20 10:19:14 来源:银河澳门官网入口

菌株保存

对于每个阳性样品,保存检出的食源性致病菌分离株,以便用于进一步的研究;分离菌株的编号应具有唯一性,标识清楚;标签应防水、字迹耐冻;各省级实验室应建立食源性致病菌菌种库,妥善保存食源性致病菌分离株。

推荐常见的食源性致病菌菌株保藏方法有以下2 种:

1. 甘油冷冻保藏法

(1) 保藏时间

本方法适合于菌种的长期保藏,保藏时间可达10 年以上。

(2) 方法

在充分加热混匀的BHI(副溶血性弧菌、创伤弧菌保存时BHI 中NaCl 应加至3%)中加入甘油,使甘油达总体积的40%~50%,充分混合,分装至菌种保存管(2 mL 左右),121 ℃高压20 min,备用;使用无菌棉签从非选择性平板上取新鲜纯培养菌落,加入装有BHI 和甘油的无菌冻存管中,混匀后,-80℃保存(如果无-80℃冰箱,可选择-40℃保存,但保存效果较差)。

(3) 注意事项

每株菌至少保存2 管,分别放置在2 个不同冻存盒中,一盒日常使用,另外一盒长期保存;使用时,取出相应的冻存盒,快速接种,以避免反复冻融;使用时,无菌操作,避免污染。

2.半固体保藏法

(4) 保藏时间

本方法适合于短期菌种保藏,保藏时间一般为3~6 个月。

(5) 方法

无菌操作,挑取待保藏的菌种,穿刺接种约含5 mL 无菌半固体营养琼脂或半固体脑心浸液琼脂(副溶血性弧菌、创伤弧菌保存时BHI 中NaCl 应加至3%)的小试管(约15 mm×100 mm)中。无菌操作吸取灭菌液体石蜡,加入已培养好的菌种上面,液体石蜡用量以高出半固体1 cm 为准,使菌种与空气隔绝。将试管直立,置4 ℃或室温(副溶血性弧菌、创伤弧菌)下保存。

(6) 注意事项

副溶血性弧菌和创伤弧菌应放置室温保存。

此外,也可以购买商品化的菌种保存管保存菌株,具体方法见生产厂家提供的操作指南。

3.其他方法

也可以购买商品化的菌种保存管保存菌株,具体方法见生产厂家提供的操作指南。

 

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