样品的稀释
固体和半固体样品:称取25 g样品至盛有225mL灭菌蒸馏水的锥形瓶中,充分振摇,即为1:10稀释液。或放入盛有225 mL无菌蒸馏水的均质袋中,用拍击式均质器(不推荐使用刀片式均质器)拍打2min,制成1:10的样品匀液。
制成1:10的样品匀液。
液体样品:取25mL样品至盛有225 mL无菌蒸馏水的锥形瓶(可在瓶内预臵适当数量的无菌玻璃珠)中,充分混匀,制成1:10的样品匀液。
取1mL1:10稀释液注入含有9mL无菌水的试管中, 另换一支1mL无菌吸管反复吹吸,此液为1:100稀释液。
样品的稀释不推荐使用刀片式均质器
原标准为“反复吹吸50次”(原标准为“反复吹吸50次”)。可使用漩涡混匀器。可使用漩涡混匀器拍击式均质器
取1mL1:10稀释液注入含有9mL无菌水的试管中, 另换一支1mL无菌吸管反复吹吸原标准为“反复吹吸5次”,此液为1:100稀释液。
按5.1.3操作程序,制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次,换用1次1 mL无菌吸管。5.1.5根据对样品污染状况的估计,选择2个~3个(原标准为“3个”) (液体样品可包括原液)在进行10倍递增稀释的同时,每个稀释度分别吸取1 mL样品匀液于2个无菌平皿内。同时分别取1 mL稀释液加入2个无菌平皿作空白对照。
及时将15mL~20 mL冷却至46℃的马铃薯-葡萄糖琼脂或孟加拉红培养基(可放置46℃±1℃恒温水浴箱中保温)倾注平皿,并转动平皿使其混合均匀。