细菌总数测定

指被检样品经过采样处理，在一定条件下培养后（含培养基成分、培养温度、培养时间、pH值、需氧性质等），25cm2表面上所含菌落的总数。本方法规定的培养条件下所得结果，只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧菌落总数。

检测细菌总数主要作为判定公用毛巾、床上卧具被污染的程度的标志，及清洗消毒效果的判定和评价提供依据。

操作步骤

1 采样方法

  1）随机抽取清洗消毒后准备使用的毛巾、床上卧具。

  2）用灭菌生理盐水湿润棉拭子，在毛巾、枕巾对折后两面的中央各25cm2（5cm×5cm）面积范围；床单、被单在上下两部各25cm2范围内有顺序地来回涂抹，用灭菌剪刀剪去棉签手接触的部分，将棉签手接触的部分，将棉拭子放入10mL生理盐水内，4h内送检。

2 检验方法

   1）将放有棉拭子的吸管充分振摇。此液为1：10稀释液。

   2）以无菌操作，吸取2mL检样，分别注入到两块灭菌平皿内，每皿1mL。如污染严重，可十倍递增稀释，即吸取1mL加到9mL灭菌生理盐水中，混匀，此液为1：100稀释液。每个稀释度做两块平皿。

   3）将已融化冷至45℃左右的营养琼脂培养基倾入平皿，没皿约15mL，并立即旋摇平皿。冷凝后放36℃±1℃培养箱培养48h。

菌落计数方法

       作平皿菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查以防遗漏，在记下各平皿的菌落计数后，求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数。若平皿中有连成片状的菌落，该平皿不宜计数；若片状菌不到平皿的一半，而其余一半中菌落分布均匀，则可将此半个平皿菌落计数后乘2，代表全皿菌落数。

     公用毛巾、床上卧具细菌总数按公式（1）计算：

                   m=k·n /2       ¨¨¨¨¨¨（1）

       式中：m——细菌总数，cfu/25cm2

                  k——稀释倍数；

                  n——平均菌落数。

菌落报告方式

  GB/T  18204.2—2000中的第9章

大肠菌群

 指一群在37℃、24h能发酵乳糖、产酸、产气、需氧和兼性厌氧的革兰阴性无芽孢杆菌。

    该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价公用毛巾、床上卧具的卫生质量。

操作步骤

纸片法：用灭菌生理盐水湿润5cm×5cm大肠菌群快速测定纸片两张，分别粘贴在毛巾、床上卧具规定部位和面积范围内，约30s后取下，置于无菌塑料袋内。将已采样的纸片置36℃±1℃培养箱内培养16~18h，观察结果。

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