即最低（或最小）抑菌浓度（MIC）的测定。
基本原理：
在肉汤或琼脂中将抗菌药物进行一系列（对倍）稀释后，定量接种待检菌，35度孵育24h后观察。抑制待检菌肉眼可生长的最低药物浓度，即为该药物对待检菌的最低抑菌浓度。
试验方法
1. 取无菌试管2排，分别为待检菌菌液管和质控菌菌液管，管中为经肉汤倍比稀释的抗菌药物。（不同抗菌药物对不同的特定细菌所设置的抗菌药物梯度不同。）
2.另再取3支试管，分别作为肉汤对照管、待检菌生长对照管和质控菌生长对照管。
3. 加入不同浓度的含抗菌药物的肉汤和菌悬液后（加入菌悬液的最终浓度－肉汤稀释法105CFU/ml，琼脂稀释法为104CFU/点），置35度培养箱中孵育18－24h，观察有无细菌生长。
例：
取无菌试管26支，排成2排。每管加入MH肉汤2ml，在第一管加入经MH肉汤稀释的药物原液（256mg/L）2ml混匀，然后吸取2ml至第2管，混匀后再吸取2ml至第3管。如此连续对倍稀释至第13管，并从第13管中吸取2ml弃去。
此时各管含药浓度依次为128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125mg/L。
第1排试管每管加入待检菌菌液（1×107CFU/ml）0.1ml,第2排试管每管加入质控菌菌液（1×107CFU/ml）0.1ml，最终接种菌量约为5×105CFU/ml
结果判断
药物最低浓度管无细菌生长者（对照管细菌生长良好），即为待检菌的最低抑菌浓度（MIC）。
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