B.3.1 每份样品接种4管酸性肉汤和2管麦芽浸膏汤。每管接种1 mL（g）～2 mL（g）样品(液体样品为1 mL～2 mL，固体为1 g～2 g，两者皆有时，应各取一半)。培养条件见表B.2。

表B.2 酸性罐藏食品（pH≤4.6）接种的酸性肉汤和麦芽浸膏汤

 

培养基	管数	培养温度 （℃ ）	培养时间（h ）
酸性肉汤	2	55±1	48
酸性肉汤	2	30±1	96
麦芽浸膏汤	2	30±1	96

B.3.2 经过表B.2中规定的培养条件培养后，记录每管有无微生物生长。如果没有微生物生长，则记录后弃去。

B.3.3 对有微生物生长的培养管，取培养后的内容物的直接涂片，革兰氏染色镜检，记录观察到的微生物。

B.3.4 如果在30 ℃培养条件下在酸性肉汤或麦芽浸膏汤中有微生物生长，将各阳性管分别接种2块营养琼脂或沙氏葡萄糖琼脂平板，一块作需氧培养，另一块作厌氧培养。

B.3.5 如果在55 ℃培养条件下，酸性肉汤中有微生物生长，将各阳性管分别接种2块营养琼脂平板，一块作需氧培养，另一块作厌氧培养。对有微生物生长的平板进行染色涂片镜检，并报告镜检所见微生物型别。培养程序见图B.2。

B.3.6 挑取30 ℃需氧培养的营养琼脂或沙氏葡萄糖琼脂平板中的单个菌落，接种营养琼脂小斜面，用于后续的革兰氏染色镜检。同时接种酸性肉汤或麦芽浸膏汤进行纯培养。

挑取30 ℃厌氧培养的营养琼脂或沙氏葡萄糖琼脂平板中的单个菌落，接种酸性肉汤或麦芽浸膏汤进行纯培养。

挑取55 ℃需氧培养的营养琼脂平板中的单个菌落，接种营养琼脂小斜面，用于后续的革兰氏染色镜检。同时接种酸性肉汤进行纯培养。

挑取55 ℃厌氧培养的营养琼脂平板中的单个菌落，接种酸性肉汤进行纯培养。

B.3.7 挑取营养琼脂小斜面中的培养物涂片镜检。挑取30 ℃厌氧培养的酸性肉汤或麦芽浸膏汤培养物和55 ℃厌氧培养的酸性肉汤培养物涂片镜检。

B.3.8 将30 ℃需氧培养的纯培养物接种于营养琼脂或沙氏葡萄糖琼脂平板中进行厌氧培养，将30 ℃厌氧培养的纯培养物接种于营养琼脂或沙氏葡萄糖琼脂平板中进行需氧培养，将55 ℃需氧培养的纯培养物接种于营养琼脂中进行厌氧培养，将55 ℃厌氧培养的纯培养物接种于营养琼脂中进行需氧培养，以鉴别是否为兼性厌氧菌。

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