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实验室使用商品化培养基和试剂的质量控制的测试方法(GB4789.28-2013)



录入时间:2014-1-14 9:53:45 来源:银河澳门官网入口

6.2实验室使用商品化培养基和试剂的质量控制的测试方法

6.2.1 非选择性分离和计数固体培养基的半定量测试方法

6.2.1.1平板的制备与保存

按照6.1.1.1中要求进行。

6.2.1.2工作菌悬液的制备

将标准储备菌株接种到非选择性肉汤培养过夜作为工作菌悬液。

6.2.1.3 接种  

用1 μL接种环进行平板划线(如图2)。A区用接种环按0.5 cm的间隔划4条平行线,按同样的方法 在B区和C区划线,最后在D区内划一条连续的曲线。同时接种两个平板,划线时可在培养基下面放一 个模板图,并按标准规定的培养条件培养平板。

              图2目标菌半定量划线法接种模式图

操作时用接种环而不用接种针,接种环应完全浸入培养基中。取一满环接种物,将接种环接触容 器边缘3次可去除多余的液体。划线时,接种环与琼脂平面的角度应为20°〜30°。接种环压在琼脂表 面的压力和划线速度前后一致,整个划线应快速连续,移取液体培养物时应将接种环伸入培养液下部 分以防止环上产生气泡或泡沫。

通常用同一个接种环对A〜D区进行划线,操作过程不需要对接种环灭菌。但为了得到低生长指数 G,在接种不同部分时应更换接种环或对其灭菌。

6.2.1.4 计算

培养后,评价菌落的形状、大小和生长密度,并计算生长指数G每条有比较稠密菌落生长的划 线则G为1,每个培养皿上G最大为16如果仅一半的线有稠密菌落生长,则G为0.5如果划线上没有 菌落生长、生长量少于划线的一半或菌落生长微弱,则G为0记录每个平板的得分总和便得到G如, 菌落在A区和B区全部生长,而在C区有一半线生长,则G为10

6.2.1.5 结果解释

目标菌在培养基上应呈现典型的生长。目标菌的生长指数G大于或等于6时,培养基可以接受。非选择培养基的G值通常较高。

6.2.2选择性分离和计数固体培养基的半定量测试方法

6.2.2. 1目标菌半定量测试方法

按照6.2.1中要求进行。

6.2.2.2非目标菌(选择性)半定量测试方法

按照6.1.2.2中要求进行。

6.2.3非选择性增菌培养基、选择性增菌培养基和选择性液体计数培养基的定性测试方法

6.2.3.1 培养基的制备

将培养基分装试管,每管10 mL

6.2.3.2 工作菌悬液的制备

将标准储备菌株接种到非选择性肉汤培养过夜,进行10倍系列稀释至10-3,或采用其他方法,制备 成105 CFU/mL〜107 CFU/mL的菌悬液作为工作菌悬液。

6.2.3.3 接种

用1μL接种环取一环工作菌悬液直接接种到用于性能测试的液体培养基中,按适合的培养时间和 温度进行培养。

6.2.3.4 结果解释

用目测的浊度值(如0〜2)评估培养基:

—0表示无混浊;

—1表示很轻微的混浊;

—2表示严重的混浊。

目标菌的浊度值应为2,非目标菌的浊度值应为0或1

有时可以观察到微生物生长后聚集成细胞团,沉积在试管或瓶子底部,发生这种情况时,小心振 荡试管后再进行观察。选择性液体计数培养基目标菌应有产气现象,非目标菌无产气现象。

6.2.4悬浮培养基和运输培养基的定性测试方法

6.2.4.1 培养基的制备

6.2.4.2 按照6.1.6.1中要求进行。

6.2.4.3 工作菌悬液的制备

将标准储备菌株接种到非选择性肉汤培养过夜作为工作菌悬液。

6.2.4.4 接种

用1 μL接种环取一环工作菌悬液直接接种到装有待测培养基的试管中,混匀后,立即用10μL接种 环取一环工作菌培养物划平行线接种平板,按标准方法中规定的培养时间和温度培养;

剩余已接种菌液的待测培养基置20~25℃放置45 min后,再用10 μL接种环取一环工作菌培养 物划平行线接种平板,按标准方法中规定的培养时间和温度培养。如保存条件有特殊要求的待测培养 基,参照附录G培养基质量控制标准要求放置或培养后再进行划线接种。

6.2.4.5 结果观察与解释

接种前后平板上目标菌的生长情况应均为良好。

6.2.5 Mueller-Hinton血琼脂的测试方法

按照6.1.7中要求进行。

6.2.6 鉴定培养基的测试方法

按照6.1.8中要求进行。

6.2.7 实验试剂的测试方法

按照6.1.9中要求进行。
 

 

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