①吸取5mL充分混匀的样品，分别加入2个标记好的、无茵带橡皮塞的试管中，用 无菌的无抗生素奶加至10ml

②每个试管加入0.2mL含量为1000IU/mL的青霉素溶液。

③毎个试管中各加ImL嗜热链球菌培养物（首先将等量的18h菌体培养物和灭菌 的无抗生素奶混合）。

④倒置混合,在(44±0.5℃）的水浴中培养1.5h。

⑤毎个试管中加人lmL 1%的TTC溶液，将试管翻转混匀，在44℃再培养1h

⑥与对照管比较，检查样品受抑制的情况。无抗生素奶对照管为深粉红色；当测试 菌体被完全抑制时，测试管颜色与用蒸馏水代替TTC的对照管颜色相同,若含有青霉素 的试管颜色发生变化，证明样品中存在青霉素。

⑦为便于比较和检测培养物的敏感性，应使用加人已知浓度青霉素的奶液进行试验 [耐热链球苘在0.01单位/mL的青霉素奶液中产生粉红色，在0.02单位/mL的青霉素的 奶液中则宂全被抑制（即无粉红色用系列稀释的样品管与加有已知浓度青霉素的标 准无菌乳的系列管对照，即可得到检测样品中青霉索的含量

⑧所有假阳性样品应在取样36h之内重新检测。敏感菌株完全被抑制的样品的确 证实验是失败的。用加热至95℃的一组对照系列梯度试验可区分抗生素和热敏抑制物

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