操作步骤

全脂奶检测中，在用亚甲基蓝、改良的Newman染色剂或Charlett染色剂对样品着色前，对牛奶涂片进行脱脂十分必要。使用Ne_an染色剂，干 燥的涂片需着色10mm,之后烘干，在水中清冼，之后再烘T;使用Charlett染色剂，干燥 的涂片仅需着色10~30s，载玻片在清洗之前不必烘干，上述两种染色剂中均包栝作为 细胞染色剂的亚甲基蓝。

两种配方中都有用作脱脂剂的1，1，2，2_四氯乙烷，也可用毒性较小的1，1，1_三氯 乙烷代替此试剂。操作时应使用通风橱，以免吸人有害蒸气。

体细胞和微生物染色后呈蓝色，但在ChaHett染色剂中，碱性品红使得牛奶蛋白呈现 粉红色背景。使水平热平板或扇形干燥器进行干燥。

Whiteside黏度试验这是诊断乳腺炎的一种简单、快捷、间接的测试方法,也是 一种估计牛奶中细胞数量的间接方法。在患乳腺炎牛的奶中，当细胞数量很大吋，用碱滴 定奶液,细胞中释放出的核酸能产生明显的黏度.

操作步骤

将1份lmol/L NaOH与5份奶或乳房分泌液在玻璃盘或碟中混合,用玻璃棒搅拌约15S

记录黏滞性产生的情况。随细胞数里的增加黏滞性增强，若无黏滞性增强，则记录为 阴性，表明牛奶正常。

培养检测法引发乳腺炎的微生物分离通常是用划线或倒平板技术从单个1/4 样品中得到的，所用的培养基应适合大部分乳腺炎微生物的生长，必要用选择性培养基分 离特殊菌种。最好的非选择件培养基是5%血琼脂,但这种培养基在使用时 会产生溶血 *

Edward七叶苷结晶紫血琼脂培养基是一种选择性培养 基，能用于乳腺炎链球菌的分离。选择性试剂为结晶紫，其使用浓度为1:500000链球 菌可在该培养基上生长，而葡萄球菌等则受到抑制。乳腺炎链球等发酵七叶苷的微生物 能产生黑色菡落，而不发酵七叶驻的微生物（如无乳链球菌和停乳链球菌）则产生无色 菌落。

化脓性链球菌的另一种选择性培养基是磷脂酰乙醇胺黏菌素1，2，3，4 -萘四酮酸血 琼脂培养基(COBA) 1,2,3,4-萘四酮酸岳一种与萘啶酮酸相似的抗菌成 分，能抑制革兰氏阴性菌和葡萄球菌。

分离步骤

用4mm接种环将O.OlmL奶划线于预先准备好的干燥[flL琼脂平板表面，当检验取白 同一个奶牛的4个1/4样品时，在同—平板的不同K域划线。37℃培养48h，在24~48h 进行检测。因接种时使用的是固定的数鲎，因而可与单个1/4样品进行比较，记录所有的 溶血菌落。

分离平板上生长的大部分菌落为可疑菌：记录具有代表性菌落的形状、大小、溶血 (如果冇）、着色、革兰氏反应和形态，这桦观察结果能确定菌株的种类，但必要时还需做进 一步的测试。此时对可疑的葡萄球菌进行载玻片凝固酶测试非常方便。阳 性反应表明存在金黄色葡萄球。可疑链球菌需进行生理试验，也可用沉淀素试验分离尖地链球菌。

如果检测出引发乳腺炎的致病菌，表明动物可能发生了临床或亚临床的乳腺炎，这时 需进一步检测该致病菌对抗生素的敏感性。 -

药敏试验

抗生素的选择对乳腺炎的治疗非常重要。从患病乳牛的牛乳中分离的致病菌纯菌株可用于药敏试验。

将分离的致病菌接种到适当的肉汤培养基（营养肉汤或酵母膏葡萄糖Icmco肉汤） 中，37℃培养24h将O.lmL培养物接种于预先铺好并干燥的琼脂平板上（葡萄球菌对 用营养琼脂，链球菌可用酵母膏葡萄糖肉汁琼脂），用无菌棒涂布平板，放至微干，用纸片

笫二部分特殊食品的微生物检测

分放器在琼脂表面放置一系列适当的抗生素纸片（也可使用经火焰灼烧过的无菌镊子）。 从制造商处可买到纸片和纸片分放器

37℃培养24h，记录纸片周围的抑菌圈直径。抑菌圈的大小表明菌株对特定抗生素 的敏感程度对于乳腺炎的治疔十分重要。但应注意:纸片周边出现较大抑菌圏的抗生 素，其疗效并不一定比产生小抑菌圏的抗生素疗效好.因为很多因素会影响抑菌圈的大小 (Cooper,1955Linton, 1961),这种方法通过抗生素的抑菌圏检测其最小抑制浓度，一个 简单方法是Difco公司的E-测试法，这种方法使用了一种可放置在已接种平板上的抗生 素梯度条。

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