用van Niel的酵母浸膏乳酸盐肉汤（见325页）从瑞士奶酪屮分离到乳酸菌。 这种培养基之所以称之为选择培养基是因为它能提供满足丙酸菌生长而抑制其他菌生长 的最小的营养成分，需要时可以用它做丙酸杆菌的计数。在原始的van Niel肉汤培养基 中加人琼脂就可制成半固体培养基。培养基中的乳酸发酵可以产生二氧化碳，所以，若培 养后培养基产生分裂，则可怀疑有丙酸菌存在。如可能应在由Gas Pak®系统 提供5%的CO2厌氧状态下分离丙酸菌。

操作步骤

(1) 制备稀释液，在45℃接种熔化的酵母膏乙酸半固休琼脂，在手中转动 试管充分混匀，立至冷却，表面用冷却至45℃的2%琼脂封住，30℃培养。最好在5%的 二氧化碳厌氧的环境中培养7〜10d。

(2) 试管的培养基表面若出现气体裂缝则认为有可疑的丙酸菌，用显微镜观察并进 一.步转接培养验证。丙酸菌为小的革兰氏阳性球杆菌，无运动性。通过这些特征能很容 易地将它与培养基中的大肠菌群和梭状芽孢杆菌区分开。记录产生裂缝的最髙稀释度， 得出每克奶酪中丙酸菌的佔计值。

(3) 从一个可疑的阳性管中取一环菌划线于酵母膏乙酸琼脂，30℃培养5〜7d后，再 用5%的二氧化碳厌氧培养或将层状平板置于富含二氧化碳的环境中需氧培养，最好采 用厌氧培养法：

(4) 选择单个菌落：革兰氏染色后观察，将可疑菌落转接到酵母浸膏乳酸盐肉汤或 酵母葡萄糖肉汁汤中，30℃培养,需要时应再次划线分离。

(5) 分离的纯菌株穿刺接种到酵母葡萄糖肉汁琼脂中，培养到有菌长出， 然后表面用灭菌的液体石蜡覆盖。

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