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沉淀素试验



录入时间:2013-12-19 10:04:42 来源:银河澳门官网入口

  Lancefield方法中链球菌族抗原溶液的制备

(1)  50mL酵母葡萄糖Lemco肉汤培养基中接种链球菌,过夜培养;

(2)将肉汤培养基离心,弃去上清液;.

(3)  在细菌沉淀中加人2mL(0.05mol/L的,含有8.5g/LNaClHC1溶液,用移液管 将悬浮液转移到小试管中;

(4)  将试管在沸水浴中加热l0min

(5)   用流水冷却;

(6) 滴加1滴0.04%的酚红,液体应由红变黄;

(7)  逐滴加人0.3mol/L NaOH溶液至液体呈碱性(出现红色),然后再逐滴加入0.lmol/L HCl直至液体呈中性(颜色为鲑粉色);

(8)离心用巴斯德移液管转移上清液至另一试管中,弃去沉淀,该上清液包含有需要使用的抗原,如果抗原提取液需要保存,可加人0.5%的石炭酸,并存放于冰箱中。

13.6.2沉淀环试验

该试验为沉淀素试验中最常用的方法,通常用来检测链球菌。用1:10〜1:107的抗 原10倍稀释液可以进行粗略定量试验。

操作步骤

(1)    6mm*50mm试管中加入O.lmL抗体:

(2)    在抗体上加人0.1mL已制备好的抗原或系列抗原稀释液。小心操作,以使两溶液之间形成清晰的界面。用微量巴斯德移液管,将管口正好抵住抗体表面上部的试管壁, 以使抗原溶液流向抗体表面;

(3)    以同样方式做盐水-抗血清对照和抗原-阳性血清对照。

(4)    结果:30min内试剂界面出现白色沉淀,即为阳性反应。

若实验经费较少,需减少试剂用量,可以用毛细管代替6_x 50mm试管,毛细管可 以垂直插人橡皮泥中。

如果用系列抗原稀释液做沉淀素试验,通常会有一根试管比所有其他试管的沉淀出现的都早,那么这根试管抗原对抗体的稀释比例为最佳比例。

 

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