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倾倒平皿法



录入时间:2013-12-5 11:10:50 来源:银河澳门官网入口

 选用适当的培养基并在适的培养条件下时以对样品中的活菌或菌落(如菌落形成 单位)计数。水溶性或可在水中制成悬浮液的®体样品(如土样、面粉、奶粉、糖),可以在 称取样品后,加入无菌水配制成稀释液,并按以下介绍的方法计数;有些固体物质(包括一些食品,如奶酪、肉等)需要在无菌水中浸泡后得到悬浮液一般使用的稀释 液包括蛋白胨水稀释液,蛋白胨盐稀释液和25%Ringer氏溶液。

在平皿屮加人已知量的悬浮液或其稀释液,倒入融化的琼脂。琼脂凝固置于温箱中培养后计数。应该选择平板菌落数小于300的平板计数。需要时可以采用双平行或三平 行平板。

下面介绍关丁液体样品的标准计数方法。对于不同的物质或产品,操作步骤有所不同。

样品的混合

在进一步检测前,必须将样品充分混匀。对于液体样品,如果瓶中的液体没有完全充满,可以在30cm的范围内振动瓶子25次混匀。如果样品的瓶子是满的,快速将瓶子翻 转M次彻底浞匀,然后倒出约1/4的内容物,再按上述方法摇动25次。

稀释液的制备

(1)       取一支lmL的吹吸移液管T将移液管的尖部垂直插人样品液面下不到3cm的位 置,采用安全移液方式,吸取到lmL刻度后吹掉,反复1U次。吸取lniL液体,移液管尖 贴仵瓶颈,使管外壁的液体流下。将移液管置于第一管稀释液中,移液管尖部靠在试管内壁,稀释液液面以h 2〜处,让移液管中的液体流出,移液管不能接触稀释液,将移液管静置知,使残余的液滴全部流出,并用吹吸球轻轻吹出管内液体。用完的移液管放入 装有灭菌液的容器中^第一个试管标记为1/101CT、

(2)       取一只新的移液管,放人第一个稀释度的试管屮,吸取到约lmL的刻度后放出, 反复吹吸10次使内容物混匀(或在手中转动试管)。试管的尖部不要低于液面2〜3cm。 然后移取丨mL稀释液到第二管稀释液中,如上所述,使移液管中液体流出。同样,如上步 所述,移液管放人装有灭阑液的容器屮。并标记稀释试管为1/】00或10_2。

(3)       取另一只新的吸管和稀释管,采用同样的方法稀释到1/1000或10人

(4)       根据预测样品中可能存在的细菌数,采用相同的操作步骤可以进一步稀释到 10 4、川_5等需要的稀释度。假定按多数细菌的体积大于l^m3计箅,则细菌团的计数不 可能大于1012/mL。腐败的肉类表面的细菌数约为lOVcm2,河水的细菌数约为104106/mL。

平板的制备

(1)取一支新的移液管,放人最高稀释度的试管中(如10_3),吹吸10次后混匀稀释液,取lmL稀释液,移液管尖部接触试管壁放去多余的液体,移人平皿中。移液管尖部接 触平板壁,静置知,使管壁的液体慢慢流下,并用吹吸球轻轻吹出管内液体c

(2)                                         使用同一支吸管从10 2稀释度的试管中吸取lmL稀释液移取到平板中,注意 在移取前先吹吸液体3次清洗移液管内部并将稀释液混匀。

(3)                               同样的方法从10     —和原液中移取lmL液体到平皿中:

(4)       另外一种更快的方法是在稀释的同时移取溶液。即通过吹吸10次将液体混匀 后,移取lmL液体到平皿中,然后再移取lmL到另一个有稀释液的试管中。

倒平板

(1)   每个平板中加人10mL融化的琼脂培养基并迅速往复摇动和转圈晃动5〜l(hs 使培养基与接种物充分混合。严格的操作方法是往复摇动5次,顺时针转动5次,与第一 次运动方叼垂直摇动5次,逆时针转动5次。用这种方法能保证样品充分分散,操作时注 意不要让琼脂溅到平皿的盖上。

注意:从稀释样品至倒培养基的时间不能超过30min(—般为15〜30min),因为长时 问放置可能会造成稀释液中悬浮的细菌死亡、增长或菌落的分离。

(2)   待平板冷却,翻转后置于适当的温度培养。注意平皿的标识必须正确。花点时 间研究如何标识平皿很有必要。使用代码标识可以避免混淆,但过多的书写标记会浪费时间,可以使用不同颜色的记号笔以减少e录。为r尽快达到温度平衡,在培养箱屮叠放 的平板不能起过六个。

注意:在整个操作过程中要避免污染。移液管使用前快速通过酒精灯外焰灼烧;样 品瓶或试管在拿掉塞子及重新盖上前,都要将W部在火焰上灼烧;平皿盖开口尽量小,只 要能倒人培养基即可;倒琼脂培养基前,将瓶壁或试管壁擦干;拿掉塞子后(或在再次盖上 瓶塞之前)要灼烧瓶颈部。

 

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