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单核细胞增生李斯特菌的增菌检测方法



录入时间:2013-11-29 9:34:41 来源:银河澳门官网入口

(1)225mLFraser基础肉汤中分别加入2.25mL无菌氯化锂溶液、0J3mL尤菌萘啶酮酸钠盐溶液、1.12mL无菌吖啶黄溶液和2.25mL无菌柠檬酸铁铵溶液(详见附 录1中培养基及其无菌添加物)。混合后制成50%Fraser肉汤,加人样品后置于30C 培养Mh,进行初增菌。

(2)  将一环增菌培养物划线于牛津琼脂上,另取一环接种于PALCAM琼脂上平板在35℃37℃培养48h(牛津琼脂平板在需氧条件下培养,PALCAM琼脂平板在第 10.1中描述的微生物需氧条件下培养)。

0.1mL增菌肉汤转接到装有10mL Freser基础肉扬的试管中,置于35℃37℃培养48h,进行二次增菌。

(3)  (2)中的方法转接二次增菌液于牛津琼脂平板和PALCAM平板。

李斯特菌属快速筛选试验

使用适当的ELISA试剂盒可以对初次和二次增菌液进行快速检测,从而对单核细胞增生李斯特菌进行快速筛(如TECRA李斯特菌可视免疫测定法)。

李斯特菌的鉴定和验证

(1)  李斯特菌能水解七叶苷,除格氏李斯特菌外,其他李斯特菌均不能分解甘露醇产酸。在牛津琼脂平板上,李斯特菌菌落直径为23mm,带有黑褐色或黑色晕轮(七叶苷水解所形成),菌落的中心经常是下凹的;在PALCAM琼脂匕李斯特菌菌落直径为 1.5lnm,绿色并带有黑色的晕轮(或菌落中心为黑色)。

(2)验证时,挑取5个典型的菌落,每个菌落划线接种到胰蛋白胨大豆酵母浸膏琼脂(TSYEA)上,置于MT:37T:需氧培养2448h,分离平板上的单个菌落以确保菌株的 纯度。

(3) 检查TSYEA平板上生氏的单个菌落,使用亨利描述的菌落特征进行分离亨利认为李斯特菌在TYS平板上生成细小的、半透明的菌落,菌落呈蓝色、蓝绿 色或蓝灰色,菌落表面为细小的颗粒状,类似于粗糙的磨砂玻璃。

TSYES平板上挑取一个单个的菌落,分别接种于胰蛋白胨大豆酵母浸膏肉汤 (TSYEB)试管和胰蛋白胨大豆酵母浸膏琼脂(TSYEA)斜面上,25C培养1824h。

(4)  ffl lSYEK肉汤培养物进行菌体运动试验和革兰氏染色。李斯特菌属呈翻筋斗运动,注意与振荡培养后非致病性李斯特菌的快速直线运动进行区别。李斯特菌为小的、革兰氏阳性的、无孢子的短杆菌。

TSYEB斜而t:的生长物进行过氧化氢酶和氧化酶试验。李斯特菌过氧化氢 酶试验阳性,氧化酶试验阴性o

TSYEB培养物接种下列培养基,进行验证和鉴定试验:

a.  接种D-葡萄糖、D-水杨苷、L-鼠李糖、D-木糖发酵肉汤(含有溴甲酚紫;见附录1),35℃37℃培养,每天检查产酸的情况(生化管由紫色变为黄色)。

b.   接种硝酸盐蛋白胨水,检查硝酸盐的产生情况。3537培 养5d。

c.   使用金黄色葡萄球菌和马红球菌进行CAMP试验(见11,5.3)。3537 培养24h。

可选用API李斯特菌试剂盒HoMMeux)。Mdauchlin发现该试剂盒能够很好地鉴 定和区分不同的李斯特菌种。

 结果

李斯特菌均为革兰氏阳性、小而纤细的杆状菌,过氧化氡酶试验呈阳性,氧化酶试验 呈阴性,能分解D-葡萄糖和D-水杨苷产酸,能进行翻筋斗状运动。

 

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