Park和Sanders研制了一种分离受损弯曲杆菌的选择性培养基。ISO 10272: 1995标准推荐使用这种培养基分离弯曲杆菌。因为ISO现行方法(1997年版)和英国标 准1996修定版所介绍的抗生素混合物的制备方法都不太恰当,目前暂时仍使用Exeter 培养基分离弯曲杆菌,按照Roberts等人(1995)的操作步骤进行操作。Cony等(1995) 对各种不同的增菌、分离培养基的合理性和优点进行了详尽的比较。
由于这类培养基成分复杂,制备吋很微小的偏差都会对培养基的性能造成很大的影 响,因此,最好使用商品化的脱水培养基和制备好的抗生素补充液。
平板置于含5%〜10%氧气、10%二氧化碳和85%〜90%氮气的微需氧环境中培养。 将厌氧罐(不加催化剂的)部分排空,再注人氮气-二氧化碳混合气体至大气压,就能很容 易地得到这种混合的培养环境。也可用能安装在厌氧罐(不含催化剂)上的空气吸收/发 生袋(如牛津弯曲杆菌袋)或空气发生袋(对于不含催化剂的罐)获得培养环境(例如牛津弯曲杆菌产气试剂盒-BR56与3.4L含催化剂的厌氧罐结合使用,或BR60与2.5L含催 化剂的厌氧罐结合使用)。
检测步骤
从生禽肉等样品中直接分离
擦拭小鸡的皮肤(尤其是肛门附近的部位)或腹腔,用拭子在Preston血琼脂平板、 Exeter琼脂平板或Preston无血头孢哌酮琼脂平板的表面划线接种。置于微需氧环境中培养(见前文)血琼脂或Exeter琼脂37C培养4h,在42C下培养44〜68h; Preston 无血头孢哌酮琼脂37T:培养48hc
冷冻食品增菌
(1) 将25g食品混人225mLExeter液体培养基中,用均质器混匀。转人到带螺帽的 容器中(罐或瓶),容器顶部的开口要小(有利于保持微需氧环境),拧紧螺帽,在37℃:培养 18-48h
(2) 转接选择性琼脂培养基(如Preston无血头孢哌酮琼脂,Exeter琼脂或Preston血 琼脂)。
验证
用镜检观察法进行弯曲杆菌的验证(运动、革兰氏阴性、无孢子、弯曲的s-型的杆状 菌)。另外,弯曲杆菌的过氧化氢酶和氣化酶试验为阳性
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