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    李氏杆菌属的检测程序



    录入时间:2013-11-13 9:12:00 来源:银河澳门官网入口

    ---⑴ 增菌 
     目前常用的单核增生李斯特氏菌检测增菌肉汤主要有半量Fraser肉汤、 Fraser肉汤(FB)、UVM(Modified University of Vermont broth,也叫UVM1)、LEB(Listeria enrichment broth)和BLEB(buffered Listeria enrichment broth)  
    半量Fraser肉汤和Fraser肉汤 • 具有选择性和区别性。 • 加入柠檬酸铁铵和七叶苷,起到区别的作用。李斯特氏菌可以水解七叶苷,与培养基中的铁离子反应,使培养基变黑,可直观的从培养液的颜色就可以判断是否有单核李斯特氏菌的生长。 
    • 氯化锂、吖啶黄和萘啶酮酸作为选择性因子。 
    • 半量Fraser肉汤与Fraser肉汤所用的添加剂一样 

     

     


    • 
    半量Fraser肉汤:萘啶酮酸10mg/L,吖啶黄12.5mg/L;Fraser肉汤:萘啶酮酸20mg/L,吖啶黄的25mg/L  UVM 
    • UVM只有选择性没有区别性 
    • 加入萘啶酮酸和盐酸吖啶黄,作为选择性因子。虽然其中含有七叶苷,但是没有添加柠檬酸铁铵,不能发生黑色的颜色反应。 LEB和BLEB 
    • 只有选择性没有区别性 
    • LEB是在TSB-YE的基础上加入盐酸吖啶黄、萘啶酮酸和放线菌酮等选择性因子;加入的丙酮酸钠,有助于受损细胞的恢复;不含七叶苷和柠檬酸铁铵,无颜色反应。 
    • BLEB是在LEB基础上加入缓冲体系:磷酸二氢钾和磷酸氢二钠 检测程序---⑵分离 
    • 分离培养基有:OXA、PALCOM、LPM、MOX等,但首选仍然是OXA。分离原理主要是基于李斯特氏菌具有β-D-葡萄糖苷酶的活性,能水解培养基中的七叶苷,产生七叶素,与铁离子产生颜色反应而,使菌落为棕褐色,并带有褐色晕圈,而致病性和非致病性李斯特氏菌病都能发生这种反应 • 还有一些选择性显色培养基,如BCM、ALOA、CHROMagar listeria、Rapid’L. mono等,其原理主要是检测由毒力基因编码的溶血素,而此种溶血素只存在于单核增生李斯特氏菌和伊氏李斯特氏菌中,因而可以很好的将此两种菌同李斯特属的其他种分开。 检测程序---⑶鉴定 
    蓝色菌落检验(Henry illumination) 典型运动:相差显微镜,轻微旋转或翻跟头 动力试验:7天,伞形生长 过氧化氢酶试验:阳性 革兰氏染色:阳性短杆菌 溶血试验:穿刺接种血平板 硝酸盐还原试验:5天,阴性 
    糖发酵试验:葡萄糖、麦芽糖和七叶苷,李斯特菌属反应均为阳性,除格氏李斯特甘露醇阴性,李斯特其他种甘露醇阴性,木糖和鼠李糖最有检测意义。 目前单核细胞增生李斯特菌检验多采用国标法(GB/T4789.30)。 

     

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