利用有利于菌种保藏的一切因素,先将微生物在极低温度(-70℃ 左右)下快速冷冻,然后减压下利用升华现象除去水分(真空干燥),使微生物始终处于低温、干燥、缺氧的条件下,因而它是迄今为止最有效的菌种保藏法之一。 
适用于菌种长期保存,一般可保存数年至十余年。但设备和操作都比较复杂。 操作流程：准备安瓿管→准备脱脂乳→准备菌种→制备菌悬液→分装样品→冷冻→真空干燥→封管→存活性检测→保藏→活化。 安瓿管先用2%HCl浸泡,再水洗多次,烘干。 
将标签放入安瓿管内,管口塞上棉花,121℃ 灭菌30min,备用。 
一般,细菌要求24~48h的培养物;酵母需培养3d;形成孢子的微生物则宜保存;放线菌与丝状真菌则培养7~10d。

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