一、洗涤

1、玻璃器皿的洗涤

1.1 浸泡

新瓶使用前应先用自来水简单刷洗,然后用稀盐酸溶液（5%）浸泡过夜；培养后的玻璃器皿用后要立即浸入清水中；注意:让水能完全进入瓶皿中,不应留有气泡.

1.2 刷洗

浸泡后的玻璃器皿用毛刷沾洗涤剂洗涤（宜选用软毛刷和优质的洗涤剂,如高级洗衣粉或洗洁精）,绝对不能使用含沙粒的去污粉！洗刷时特别注意洗刷瓶角部位.

1.3 浸泡

器皿要充满清洁液,勿留气泡.浸泡时间不应少于6小时；一般应浸泡过夜.

清洗液配方:

【强液】    重铬酸钾     63g

           浓硫酸       1000ml

           蒸馏水       200L

【次强液】  重铬酸钾     120g

           浓硫酸       200ml

           蒸馏水       1000ml

【弱液】   重铬酸钾     100g

           浓硫酸       100ml

           蒸馏水       100ml

矽酸钠洗液；

使用比较安全,可以代替清洗液,但价格较贵.

先配制成100Χ贮存液:矽酸钾80g,偏磷酸钠9g,加热溶解在1000ml蒸馏水中.使用时,用蒸馏水100倍稀释.

1.4 冲洗

刷洗和浸酸后都必须用水充分冲洗,使之不留任何残迹.冲洗宜用洗涤装置,以保证冲洗效果,如用手工操作,每瓶都得用水灌满,倒掉,重复十次以上,最后再用蒸馏水漂洗2～3次,凉干备用.

 

2、胶塞的清洗

新购置的胶塞先用自来水冲洗干净后,再做常规处理.

常规洗涤方法:

        浸泡

         ↓

2%NaOH煮沸（10～20分钟）

         ↓

     自来水冲洗

         ↓

1%稀盐酸浸泡（30分钟）

         ↓

     自来水冲洗

         ↓

 蒸馏水清洗（2～3次）

         ↓

      晾干备用

 

3、塑料器皿的清洗

目前我国培养使用的塑料器皿主要是从国外购置的,是一种无毒并已经消毒过灭菌密封包装的商品.用时,只要打开包装即可,是一次使用性物品.必要时,用后经无菌处理后 ,尚可反复使用2～3次,但不宜过多.再用时仍然需要清洗和灭菌处理.塑料器皿质地软,不宜用毛刷刷洗,造成清洗困难.为此使用中一是防止划痕,二是用后要立即浸入水中,严防附着物干结；如残留有附着物,可用脱脂棉清拭掉,用流水冲洗干净,凉干、再用2%NaOH液浸泡过夜,用自来水充分冲洗,然后 用5%盐酸溶液浸泡30分钟,最后用自来水冲洗和蒸馏水漂洗干净,凉干后备用.

 

二、消毒

1.紫外线消毒

紫外线直接照射法很方便,效果好,是目前各实验室常用的消毒法.

【适用范围】空气、操作台表面和一些不能使用其它方法进行消毒的培养器皿（如塑料培养皿、培养板等）

【要求】（1）培养室的紫外线灯应距地面2.5米,使每平方厘米有0.06微瓦能量的照射,才能发生有效的消毒作用.（2）由于各种细菌对紫外线的敏感性不同,所用照射时间和剂量也不同.

【缺点】（1）产生臭氧,污染空气,对身体有害；（2）射线照射不到的部位起不到消毒作用,故消毒时,物品不宜相互遮挡.

【注意】 有人习惯于边照射边进行实验操作,这样不好,一是紫外线对细胞、试剂和培养液都有不良影响,二是对人体皮肤也有伤害.

2.湿热消毒

湿热消毒即高压蒸汽消毒,是最有效的一种方法.

【适用范围】布类、胶塞、金属器械、玻璃器皿及某些培养用液.

【要求】

培养用液、橡胶制品            10磅10分钟

布类、玻璃制品、金属器械等    15磅20分钟

3.滤过消毒

【适用范围】 大多数培养用液,如人工合成培养液、血清、酶溶液等（这些在高温下会发生变性,失去其功能,必须采用滤过法除菌.

【常用滤器】 Zeiss滤器、微孔滤膜滤器及各种不同规格的一次性滤器.常用孔径0.22um滤膜过滤一般用液即可.

【注意】 

（1）滤膜用后丢弃,滤器清洗也比较方便,先用毛刷蘸洗涤剂刷洗干净,用自来水冲洗后,再用蒸馏水冲洗,凉干即可；

（2）用前再装上一张新的滤膜；

（3）消毒时旋钮不要扭太紧,凡与空气接触部位都用纸包装好,以保证消毒时的效果；

（4）消毒后,在无菌环境中立即将旋钮扭紧；

（5）滤过少量液体时,用一种能安装在注射器上的小滤器,使用相同的滤膜,滤过时把滤过物装入注射器针管内,压出过滤物注入无菌容器中即.