平板划线的操作是为了将菌稀释从而获得纯培养的单菌落。划线有多种方式。

1.三区平板划线

三区划线中第一区所占的区域大约是平板面积的五分之一~四分之一，第二区搭过第一区的面积使微生物数量得到“稀释”，第三区搭过第二区的面积使微生物数量进一步“稀释”，第三区不可与第一区有重叠的划线。一般适用于可疑菌的分离，或可疑菌落的二次平板分离。通常划完三区后就可以出现单菌落。三区划线示意图如图3-20所示。

2.四区平板划线

四区划线中前三区划线与上面的三区划线类似，只是每一区的划线面积相应减小，同样第三区不可与第一区相重叠，第四区不可与第二区和第一区相重叠。四区划线比三区划线多稀释一次，这样通过增加划线区域，有可能会分离到更多更纯的单菌落。

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