(一)温度
1、高温灭菌(消毒)法——是最常用的物理方法。高温可引起蛋白质、核酸等活性大分子氧化或变性失活而导致微生物死亡。
★干热灭菌法(dry heat sterilization)
§焚烧法(incineration):是将被灭菌物品在火焰中燃烧,使所有的生物质碳化。简单、彻底,但对被灭菌物品的破坏极大。适用于无经济价值的物品灭菌,及不怕烧的实验器具,如接种环、镊子、试管或三角瓶口的灭菌等。
§干燥热空气灭菌法(hot-air oven):将物品放入烘箱内,然后升温至150℃—170 ℃ ,维持1—2小时。适用于玻璃、陶瓷和金属物品的灭菌,不适合液体样品,及棉花、纸张、纤维和橡胶类物质的灭菌。
特点:由于空气传热穿透力差,菌体在脱水状态下不易杀死,所以温度高、时间长。
★湿热法(moist heat sterilization) :
特点:温度低、时间短、灭菌效果高
原因:
1) 菌体内含水量越高,则凝固温度越低;
2) 蒸汽冷凝会放出潜热;
3) 饱和水蒸汽穿透力强;
4) 湿热易破坏细胞内蛋白质大分子的稳定 性,主要破坏氢键结构。
高压蒸汽灭菌法
利用水的沸点随水蒸气压力的增加而上升,以达到100 ℃以上高温灭菌的方法。
方法:121℃(1kg/cm2或15磅/英寸2)维持15-20min。
112℃(0.5kg/cm2或8磅/英寸2)20-30min。
115℃(0.75kg/cm2或11磅/英寸2)20-30min。
应根据灭菌物品的性质或成分选择灭菌温度
例如:生理盐水、营养琼脂等培养基用121 ℃。
含葡萄糖、乳糖、氨基酸等培养基用112 ℃。
适用:耐高温物品,玻璃仪器、含水或不含水的物品。
高温对培养基的不利影响:
▲会产生混浊或形成不溶性沉淀
▲营养成分被破坏( PO4-3存在,葡萄糖生成酮糖,菌不利用);
▲色泽加深(褐变如产生氨基糖等);
▲改变培养基的pH值(通常下降0.2) ;
▲形成有害物质,抑制微生物生长;
消除有害影响的措施
采用特殊的加热灭菌法
过滤除菌法
加入螯合剂
2、低温抑菌
低温——低温是通过降低酶反应速度使微生物生长受到抑制。
冷藏法:5℃,微生物斜面菌种放置冷藏箱中可保存数周至数月而不衰竭死亡;食品保鲜
冷冻法:食品工业中采用-10℃左右的冷冻温度较长时间地保藏食品;冷冻法也可用作菌种保藏,但所需温度更低,如-80℃低温冰箱、或-78℃干冰、或-80℃液氮中冷冻保存。
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