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临床非培养标本的采集及处理操作程序



录入时间:2012-3-8 15:44:29 来源:食品伙伴网

临床非培养标本的采集及处理操作程序

1  目的:规范临床待检标本的正确采集、送检和处理。

2  适用范围:微生物检验实验室的所有临床检测标本。

3  职责:

3.1  所有采集标本的人员均需按本SOP 操作,实验室工作人员有责任向临床医生、护士或病人

宣教。

3.2  本标准操作程序的改动,可由任一使用本SOP 的工作人员提出,并报经下述人员批准签字:

室负责人、科主任。

4  操作程序

4.1  本实验室检测标本为:血清或血浆、痰、生殖道拭子标本、尿液及脑脊液和胸腹水。

4.2  做好标本签收,核对检验单与标本标签是否清楚无误,送检标本是否正确、合格,给所有标

本按顺序编号,按如下操作规程操作。

4.3  查找抗酸菌操作:将标本置于水浴蒸箱加温杀菌30 分钟,取标本残留物或沉淀物加温涂布玻

片,液性标本以3000 转/分钟离心5 分钟,取标本残留物或沉淀物加温涂布玻片并标注编号后

固定,行抗酸染色,先滴加抗酸染色第一液加温(用酒精灯在玻片下来回加温置染色液冒热气,

但无气泡产生为宜)染色10 分钟,自来水冲洗净染液,以硫酸美兰复染2 分钟,水洗凉干。

镜检与报告:油镜下查找分枝、不规则红色杆菌,按如下标准进行结果报告。

1)、镜检100-300 个视野(时间不少于4 分钟)未发现抗酸菌,继续观察至300 个视野仍未发

现抗酸菌者报告抗酸菌(—);

2)、镜检100 个视野找到抗酸菌1-2 条者,报告抗酸菌可疑(±),或重涂片或重送标本检查;

3)、镜检100 个视野找到抗酸菌3-9 条者,报告抗酸杆菌阳性(+);

4)、镜检10 个视野找到抗酸菌1-9 条者,报告抗酸杆菌阳性(2+);

5)、镜检每个视野找到抗酸菌1-9 条者,报告抗酸杆菌阳性(3+);

6)、镜检每个视野找到抗酸菌多于9 条者,报告抗酸杆菌阳性(4+)。

4.4  查找普通细菌操作:液性标本取离心沉淀物涂片,拭子或脓性标本直接涂布玻片并标注编号

后固定。同时取大肠标准株(ATCC25922)和金黄色葡萄球菌标准株(ATCC25922)涂片,一起行

革兰氏染色,先滴加第一液染色1 分钟,水洗,加第二液媒染1 分钟,水洗干净;以95%酒精

脱色30 秒钟后立即水洗,再加第四液复染30 秒钟,水洗后凉干。油镜下查找菌体并观察球杆

比例;观察质控菌是否合格。

4.5  墨汁染色查找隐球菌:液性标本离心取沉淀物涂片,脓性或拭子标本直接涂片并写号,以无

菌接种环粘取少量印度墨汁与玻片上标本混匀,压盖玻片,先低倍镜下找到视野再转离倍镜观察。

若找到透亮,圆形强折光,有厚荚膜的菌体报告墨汁染色阳性;否则报告阴性。

4.6 白带常规检查:盐水管直接将棉签点至玻片后以高倍镜检有无滴虫;涂片标注编号后固定,

行革兰氏染色,先滴加第一液染色1 分钟,水洗,加第二液媒染1 分钟,水洗干净;以95%酒

精脱色30 秒钟后立即水洗,再加第四液复染30 秒钟,水洗凉干后镜检查找革兰氏阴性双球菌、

霉菌或阳性球菌、线索细胞等。阴道清洁度的按如下判断标准报告:

Ⅰ度:阴道杆菌为主,并可见大量上皮细胞。

Ⅱ度:有部份阴道杆菌,但亦有部份脓细胞和杂菌,上皮细胞少见。

Ⅲ度:仅见少量阴道杆菌和上皮细胞,有大量脓细胞和杂菌。

Ⅳ度:镜下无阴道杆菌,除少量上皮细胞外,主要的几乎全是脓细胞和大量杂菌。

4.7  肥达试验:标本标明编号,以3000 转/分钟离心5 分钟;取试管架,按每标本排5 排试管,

每排5 支;各标本用加样器取100μl 血清置于一支稀释用试管(注明检验号)中,加入1.9ml 0.9%

生理盐水混匀,第一排加入1:20 倍稀释血清各0.2ml,成1:40 倍;后稀释管再加入1.0ml 0.9%

生理盐水,成1:40 倍稀释,加入第二排试管各0.2   ml。同样方法对倍稀释至第四排试管,第

五排各加入0.2ml 0.9%生理盐水作阴性对照。从冰箱中拿出肥达反应试验稀释菌悬液,第一列

各加入H 诊断菌液0.2 ml,第二列各加入O 诊断菌液0.2 ml,第三列各加入甲型诊断菌液0.2 ml,

第四列各加入乙型诊断菌液0.2   ml,  第五列各加入丙型诊断菌液0.2   ml,混匀,置37℃水浴箱

18-24 小时。

结果判断:菌体沉淀至试管底成圆点为阴性管,出现散在颗粒状凝集为阳性管。以最高稀释管出

现散在颗粒状凝集为报告滴度。若阴性对照出现凝集则需重新稀释配制诊断菌悬液重做试验。

4.8  外菲氏试验:标本标明编号,以3000 转/分钟离心5 分钟;取试管架,按每标本排3 排试

管,每排5 支;各标本用加样器取100μl 血清置于一支稀释用试管(注明检验号)中,加入1.9ml

0.9%生理盐水混匀,第一排加入1:20 倍稀释血清各0.2ml,成1:40 倍;稀释管留1.0ml 再

加入1.0ml 0.9%生理盐水,成1:40 倍稀释,加入第二排试管各0.2 ml。同样方法对倍稀释至

第四排试管,第五排各加入0.2ml 0.9%生理盐水作阴性对照。从冰箱中拿出外菲氏反应试验稀

释菌悬液,第一列各加入OX19 诊断菌液0.2 ml,第二列各加入OX2 诊断菌液0.2 ml,第三列各

加入OXK 诊断菌液0.2 ml,混匀,置37℃水浴箱18-24 小时。

结果判断:菌体沉淀至试管底成圆点为阴性管,出现散在颗粒状凝集为阳性管。以最高稀释管出

现散在颗粒状凝集为报告滴度。若阴性对照出现凝集则需重新稀释配制诊断菌悬液重做试验。

 

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