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枯草芽孢杆菌的分离纯化



录入时间:2012-2-10 16:18:36 来源:百度文库

一. 目的

    掌握芽孢杆菌属常见种的分离、鉴定方法和技术。将土壤样品中分离的芽孢杆菌属未 知种鉴定到属。

二.原理

    芽孢杆菌能产生芽孢, 在沸水中加热不会失去生理活性, 但是不能产生芽孢的细菌会失 去活性,因而得到芽孢菌属,经过进一步的分离及生理生化鉴定得到枯草芽孢杆菌。

三.材料和器皿

显微镜 培养皿 试管 三角瓶 烧杯 移液管 涂布棒 载玻片 接种环 接种针 试管架 灭菌锅 培养箱 培养基:牛肉膏蛋白胨培养基 半固定培养基 淀粉培养基 v.p.实验培养基 孔雀绿溶液 番红复染液 NaOH 溶液等

四.操作步骤

 菌种的分离和纯化

(1)土样的采集:取土壤表层 5-10cm 下的肥土 100g 左右,把采得的土壤放入纸袋带 回实验室分离。

(2)平板的制备:溶化三角瓶中的牛肉汤蛋白胨培养基,以每皿 20ml 左右倒 6 个平 板。

(3)稀释分离法:称取肥土 5g 放入含有 45ml 水的三角瓶中,摇动片刻,然后将此瓶 用小火加热至悬浊液沸腾, 维持 15min。 而后静止 5min, 吸取上层液 0.1ml 加入到含有 4.5ml 无菌水的试管中,制成 1:100 浓度的悬液,然后分别吸取 10-2 和 10-3 土壤悬浊液各 0.2ml 滴加到上述牛肉汤蛋白胨培养基平板上(每种稀释度 2 皿) ,用涂布棒均匀涂布,并将培养 基倒置于 37℃恒温培养 1-2 天。

(4)挑菌及纯化:从上述分离的平板上分别挑取 2 个单菌落中部分菌体,在牛肉膏蛋 白胨培养基上划线纯化,经菌落特征的观察和镜检,确定是芽孢杆菌属纯种后,从中选择一 株转接于牛肉膏蛋白胨斜面上,置 37℃培养 1-2 天后备用。 (菌体应呈杆状,具芽孢,宽度 一致;菌落颜色、形状、质地、透明度等均一致)

 

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