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    标准菌株的复活、传代及性能确认



    录入时间:2012-2-9 16:14:48 来源:百度文库

    1 标准菌株的复活

        标准菌株一般为安培装冻干粉剂,依照随产品附有的菌种复活方法,以及《人间传 购回的标准菌株 标准菌株 染病微生物分类目录》和《实验室生物安全通用要求》,在相应的生物安全水平下,开启包装。用 75%酒精棉球擦拭安培瓶上部,可用砂轮或锉刀在安培瓶上部划一小痕迹,用无 菌纱布包住安培瓶,两手分别捏住安培瓶上下两端,稍向外用力便可打开安培瓶。 依据菌株特性选择合适的培养基和培养条件,用无菌吸管吸适量的液体培养基加到冻干块 上,吹打混匀成悬液,将全部悬液移入含有 5ml 合适的液体培养基中,将管中残留的几滴悬 液移种到斜面上,适宜的温度培养一定的时间。观察生长状况,可适当延长培养时间。

    2 菌株的性能确认

    2.1 纯度检查 菌落形态 取复活后的培养物, 在相应的鉴别平板或非选择平板上划线分离, 培养出单菌落, 观察菌落形态是否符合该菌株要求,同一平板上的单菌落大小,形状、颜色、质地、光泽是 否相似, 对于出现两种以上形态的菌株, 应再分别挑取单菌落划线, 检测是否出现相同特征。

    2.2 细胞形态 取划线平板上的单菌落,革兰氏染色反应应符合要求,且呈现一致性。

    2.3 生化鉴定 必要时进行生化鉴定

    2.4 污染处理 如发现菌株有污染, 挑选目标菌培养成功后, 将培养物灭菌销毁 (121℃30min)

    3 菌株的传代

    3.1 标准储备菌株的制备 标准储备菌株是在经多次传代后制备的多份相同的菌株。 将复活后经过性能确认的菌株的斜面培养物,用 0.85%的灭菌生理盐水 0.5ml 洗斜面菌苔成 菌悬液 将上述菌悬液吸入灭菌管中,加入 0.5ml40%的灭菌甘油,混匀,密封。保藏温度为—18℃

    3.2 工作菌株的制备 由冻干或超低温保存的标准储备菌株经一次传代得到的菌株。 工作菌株不宜再传代, 工作菌 株使用和储存过程中严格遵守无菌操作,即不存在交叉污染,可以多次使用。保藏温度为 4-6℃

    3.3 制备好的菌株应由室主任统一编号,标识,专人专柜保藏。

     

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