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实验:显微镜油浸系物镜的使用



录入时间:2011-12-26 15:56:51 来源:生物在线

实验目的 

1.复习显微镜低倍镜和高倍镜的使用技术; 

2.了解油浸系物镜的基本原理; 

3.掌握油浸系物镜的使用方法。 

实验内容 

1.学习油浸系物镜的使用方法。 

2.用压滴法观察酵母菌、枯草芽孢杆菌活菌。 

实验原理 

 (一)显微镜的构造 

1.显微镜的机械装置 

 (1)镜座和镜臂 它们是显微镜的基本骨架,起稳固和支持显微镜的作用。 

 (2)镜筒 镜筒上接接目镜,下接转换器,形成接目镜与接物镜(装在转换器下)间的暗室。 

 (3)物镜转换器 物镜转换器上可安装 3—4个接物镜,可以按需要将其中的任何一个接物镜和镜筒接通,与镜筒上面的接目镜构成一个放大系统。 

 (4)载物台 用于安放玻片。载物台中央有一孔,为光线通路。在台上装有弹簧标本夹和推动器,其作用为固定或移动标本的位置,使得镜检对象恰好位于视野中心。 

 (5)推动器 是移动标本的机械装置。 

 (6)调焦装置 即粗螺旋和细螺旋,是移动镜筒调节接物镜和标本间距离的机件。

2.显微镜的光学系统 

 (1)反光镜 由一平面和另一凹面的镜子组成,可以将投射在它上面的光线反射到聚光器透镜的中央,照明标本。 

 (2)聚光器 在载物台下面,它是由聚光透镜、虹彩光圈和升降螺旋组成的。其作用是将光源经反光镜反射来的光线聚焦于样品上,以得到最强的照明,使物象获得明亮清晰的效果。 

 (3)物镜 

     物镜的种类很多,可从不同角度来分类: 

     根据物镜前透镜与被检物体之间的介质不同,可分为: 

     ①干燥系物镜  以空气为介质,如常用的 40×以下的物镜,数值孔径均小于 1。 

     ②油浸系物镜 常以香柏油为介质,此物镜又叫油镜头,其放大率为 90×—100×,数值孔径值NA大于 1。 

     根据物镜放大率的高低,可分为: 

     ①低倍物镜 指 10×以下; 

     ②中倍物镜 指 20×; 

     ③高倍物镜 指 40×—65×; 

     ④油浸物镜 指 90×以上。 

 (4)目镜 目镜的作用是把物镜放大了的实像再放大一次,并把物像映入观察者的眼中。普通光学显微镜的目镜通常由两块透镜组成,上端的一块透镜称“接目透镜”,下端的透镜称“聚透镜”。上下透镜之间或在两个透镜的下方,装有由金属制的环状光阑或叫“视场光阑”。 

 (二)光学显微镜的成像原理 

    显微镜的放大是通过透镜来完成的,单透镜成像具有像差,影响像质。由单透镜组合而成的透镜组相当于一个凸透镜,放大作用更好。

实验器材 

     酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、枯草芽孢杆菌。 

     0.1%吕氏美蓝染液。 

     显微镜;载玻片;盖玻片;液体石蜡;擦镜液等。 

实验步骤 

 (一)观察前的准备 

1.显微镜从显微镜柜或镜箱内拿出时,要用右手紧握镜臂,左手托住镜座,平稳地将显微镜搬运到实验桌上。 

2.将显微镜放在自己身体的左前方,离桌子边缘约 10cm左右,右侧可放记录本或绘图纸。

3.调节光照,将 10×物镜转入光孔,将聚光器上的虹彩光圈打开到最大位置,用左眼观察目镜中视野的亮度,转动反光镜,使视野的光照达到最明亮最均匀为止。 

 (二)酵母菌、枯草芽孢杆菌水浸片的制作 

1.在载被片中央加一滴 0.1%美蓝染色液 (生理盐水),液滴不可过多或过少,以免盖上盖玻片时,溢出或留有气泡。然后按无菌操作法取培养了 48小时的啤酒酵母(培养了 16小时的枯草芽孢杆菌)少许,放在美蓝染色液(生理盐水)中,使菌体与染色波均匀混合。 

2.取盖玻片一块,小心地盖在液滴上,不能将盖玻片平放下去,应先将盖玻片的一边与液滴接触,然后将整个盖玻片慢慢放下,这样可以避免产生气泡。 

 (三)低倍镜观察 

    将标本片放置在载物台上,用标本夹夹住,移动推动器,使被观察的标本处在物镜正下方,转动粗调节旋钮,使物镜调至接近标本处,用目镜观察并同时下降载物台,直至物像出现,再用细调节旋钮使物像清晰为止。用推动器移动标本片,找到合适的目的像并将它移到视野中央进行观察。 

 (四)高倍镜观察 

    在低倍镜下找到合适的观察目标并将其移至视野中心后,轻轻转动物镜转换器将高倍镜移至工作位置。对聚光器光圈及视野亮度进行适当调节后微调细调节器使物像清晰,利用推进器移动标本仔细观察并记录所观察到的结果。 

 (五)油镜观察 

1.先用粗调节旋钮将镜筒提升(或将载物台下降)约 2cm,并将高倍镜转出。 

2.在玻片标本的镜检部位滴上一滴香柏油。 

3.从侧面注视,用粗调节旋钮将载物台缓缓地上升,使油浸物镜浸入香柏油中,使镜头几乎与标本接触。将聚光器升至最高位置并开足光圈,调节照明使视野的亮度合适,用粗调节器将载物台徐徐上升,直至视野中出现物像并用细调节器使其清晰准焦为止。 

4.观察完毕,下降载物台,将油镜头转出,先用擦镜纸擦去镜头上的油,再用擦镜纸蘸少许乙醚酒精混合液(乙醚 2份,纯酒精 3份)或二甲苯,擦去镜头上残留油迹,最后再用擦镜纸擦拭 2—3下即可,(注意向一个方向擦拭)。 

5.将各部分还原,转动物镜转换器,使物镜头不与载物台通光孔相对,而是成八字形位置,降下聚光器,反光镜与聚光器垂直,再将载物台下降至最低,用一个干净手帕将接目镜罩好,以免目镜头沾污灰尘。最后用柔软纱布清洁载物台等机械部分,然后将显微镜放回柜内或镜箱中。 

实验结果及讨论 

1.实验结果 

(1) 绘出酵母菌、枯草芽孢杆菌形态图。 

(2) 鉴别酵母菌的死活。 

2.讨论 

    针对实验原理、步骤、现象进行讨论。

 

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