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植物组培的实验设备及培养条件(2)



录入时间:2011-12-22 10:06:40 来源:互联网

 

2.2.2器械用具

)镊子类 forceps

规格:可用20cm长的镊子。镊子过短.容易使手接触瓶口,造成污染。镊子太长,使用起来不灵活。

特殊用处:如在分离茎尖幼叶时,则用钟表镊子。

)剪刀类 scissors

规格:用15cm长度。主要用于切断茎段、叶片等。

特殊用处:也可以用弯形剪刀,

)解剖刀

用处:切割较小材料和分离茎尖分生组织时。

注意:刀片要经常调换,使之保持锋利状态,

)解剖针

用处:可深入到培养瓶中,转移细胞或愈伤组织。也可用于分离微茎尖的幼叶。

 

2.3 培养条件

2.3.1温度 temperature

指标:大多数组织培养都是在2327℃之间进行,一般采用25±2℃。

低于15℃时培养,组织会表现生长停止,高于35℃时对生长不利。

作用:温度不仅影响组培苗的生长速度, 也影响其分化增殖以及器官建成等发育进程。

差异:不同植物培养的适温不同。百合的最适温度是20℃、 月季是2527℃、番茄是28℃。 不同培养目标采用的培养温度也不同, 百合鳞片在30℃下再生的小鳞茎的发叶速度和百分率都比在25℃下的高。用35℃处理草莓的茎尖分生组织35天,可得到无病毒苗。

2.3.2光照 light

组织培养中光照也是重要的条件之一, 主要表现在光强、光质、以及光照时间方面:

1) 光照强度light intensity 光照强度对培养细胞的增殖和器官的分化有重要影响, 从目前的研究情况看,光照强度对外植体、细胞的最初分裂有明显的影响。 一般来说,光照强度较强,幼苗生长的粗壮,而光照强度较弱幼苗容易徒长。

2)光质 light wave

光质对愈伤组织诱导,培养组织的增殖以及器官的分化都有明显的影响。 如百合珠芽在红光下培养,8周后,分化出愈伤组织。但在蓝光下, 几周后才出现愈伤组织,而唐菖蒲子球块接种15d后,在蓝光下培养首先出现芽,形成的幼苗生长旺盛,而白光下幼苗纤细。

3)光周期 light period

试管苗培养时要选用一定的光暗周期来进行组织培养, 最常用的周期是16h的光照, h的黑暗,研究表明,对短日照敏感的品种的器官组织, 在短日照下易分化,而在长日照下产生愈伤组织,有时需要暗培养, 尤其是一些植物的愈伤组织在暗下比在光下更好。如红花、乌饭树的愈伤组织。

2.3.3湿度humity

湿度的影响包括培养容器保持和环境的湿度条件, 容器内主要受培养基水分含量和封口材料的影响。 前者又受琼脂含量的影响。在冬季应适当减少琼脂用量, 否则,将使培养基干硬,以致不利于外植体接触或插进培养基,导致生长发育受阻。封口材料直接影响容器内湿度情况,但封闭性较高的封口材料易引起透气性受阻,也导致生长发育受影响。

环境的相对湿度可以影响培养基的水分蒸发, 一般要求70-80%的相对湿度, 常用加湿器或经常洒水的方法来调节湿度。湿度过低会使培养基丧失大量水分,导致培养基各种成分浓度的改变和渗透压的升高,进而影响组织培养的正常进行;过高时,易引起棉塞长霉,造成污染。

2.3.4渗透压penetrating pressure

培养基中添加的盐类、 蔗糖、甘露醇及聚乙二醇类高分子化合物,影响到渗透压的变化。1~2个大气压对生长有促进作用,2个大气压以上就对生长有阻碍作用, 5~6个大气压生长就完全停止,6个大气压细胞就不能生存。

2.3.5 ph

不同的植物对培养基最适pH值的要求也是不同的(表2-1),大多在5~6.5左右,一般培养基皆要求5.8,这基本能适应大多植物培养的需要。

2.3.6

气体gas

氧气是组织培养中必需的因素, 瓶盖封闭时要考虑通气问题,可用附有滤气膜的封口材料。 通气最好的是棉塞封闭瓶口,但棉塞易使培养基干燥, 夏季易引起污染。固体培养基可加进活性炭来增加通气度,以利于发根。培养室要经常换

气,改善室内的通气状况。液体振荡培养时,要考虑振荡的次数、振幅等,同时要考虑容器的类型、培养基等。

 

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