实验目的

1．了解消毒和灭菌的原理。. 

2．掌握常用的灭菌方法。 

实验内容 

1．学习干热灭菌的操作技术。 

2．学习高压蒸气灭菌的操作方法。 

实验原理 

    灭菌是指杀灭物体中所有微生物的繁殖体和芽孢的过程。消毒是指用物理、化学或生物的方法杀死病原微生物的过程。 

    灭菌的原理就是使蛋白质和核酸等生物大分子发生变性，从而达到灭菌的作用，实验室中最常用的就是干热灭菌和湿热灭菌。 

    干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快，反之含水量越小，凝固缓慢。因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度高（160～170℃），时间长 （1～2h）。但干热灭菌温度不能超过 180℃。否则，包器皿的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧。 

    高压蒸气灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸气。待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸气不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于 100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。 

    在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大。其原因有三：一是湿热中细菌菌体吸收水分，蛋白质较易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低，二是湿热的穿透力比干热大，三是湿热的蒸气有潜热存在。这种潜热，能迅速提高被灭菌物体的温度，从而增加灭菌效力。 

实验器材 

    实验一所配制的培养基，培养皿，培养皿，试管，吸管，电热干燥箱、手提式高压灭菌锅等。 

实验步骤 

1．高压蒸气灭菌 

(1) 首先将内层锅取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架相平为宜。 

(2) 放回内层锅，并装入待灭菌物品 （培养基等）。注意不要装得太挤，以免防碍蒸气流通而影响灭菌效果，三角烧瓶与试管口端均不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透人棉塞。 

(3) 加盖，并将盖上的排气软管插入内层锅的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺拴，使螺栓松紧一致，勿使漏气。 

(4) 用电护或煤气加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸气压力增加而逐渐上升。当锅内压力升到所得压力时，控制热源，维持压力至所需时间。 

(5) 灭菌所需时间到后，切断电源或关闭煤气，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至“0”时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。

2．干热灭菌 

(1) 装入待灭菌物品 

    将包好的待灭菌物品（培养皿，试管，吸管等）放入电烘箱内，关好箱门。 

(2) 升温 

    接通电源，拨动开关，打开电烘箱排气孔，旋动恒温调节器至绿灯亮，让温度逐渐上升。当温度升至 100℃时，关闭排气孔。在升温过程中，如果红灯熄灭，绿灯亮，表示箱内停止加温，此时如果还未达到所需的 160～170℃温度，则需转动调节器使红灯再亮，如此反复调节，直至达到所需温度。 

(3) 恒温 

    当温度升到 160～170℃时，借恒温调节器的自动控制，保持此温度 2h。 

(4) 降温 

    切断电源、自然降温。 

(5) 开箱取物 

    待电烘箱内温度降到 70℃以下后，打开箱门，取出灭菌物品。 

实验结果及讨论 

    针对实验原理、步骤、现象进行讨论。 

实验作业 

1．在干热灭菌操作过程中应注意哪些问题，为什么？ 

2．为什么干热灭菌比湿热灭菌所需要的温度高，时间长？ 

3．高压蒸气灭菌开始之前，为什么要将锅内冷空气排尽?灭菌完毕后，为什么待压力降至“0”时才能打开排气阀，开盖取物? 

4．在使用高压蒸气灭菌锅灭菌时，怎样杜绝一切不安全的因素？

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