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    免疫印迹法检测幽门螺杆菌抗体结果分析



    录入时间:2011-12-19 16:47:54 来源:互联网

    【摘要】  目的 评价免疫印迹法检测Ⅰ型和Ⅱ型幽门螺杆菌抗体的价值。 方法 采用免疫印迹法对门诊随诊患儿227例进行分型检测。 结果 检出HP阳性85例,阳性率为37.44%,其中Ⅰ型58例,占68.23%;Ⅱ型27例,占31.76%。 结论 免疫印迹法检测幽门螺杆菌抗体具有较高的敏感性和特异性。方法简单,时间短,对临床治疗有重要的指导意义。

    【关键词】  幽门螺杆菌 免疫印迹法 空泡毒素 细胞毒素相关基因A

    幽门螺杆菌(Helicobacter,简称HP)是慢性胃炎﹑消化性溃疡和非溃疡性消化不良的重要因素,是胃癌的危险因子。HP在全球人群的感染率超过50%,而且随着年龄的增加有递增趋势[1]。表达空泡毒素(VacA)蛋白和细胞毒素相关基因A(CagA)的HP菌株致病力强。本文对患儿血清用免疫印迹法进行检测并分型,探讨不同型别HP与患者的关系,及时指导临床治疗。

      1  材料与方法

      1.1  样本  于2006年8月~2007年8月到我院门诊患儿,抽血2ml,留取血清待查。

      1.2  试剂与方法  采用免疫印迹法进行分型,试剂盒由上海元谷科技发展有限公司提供。本试剂原理是先将幽门螺杆菌的混合抗原用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,按分子量大小不同分开,再将其转移至硝酸纤维膜,如果被检血清有相应抗体,应用酶联免疫吸附反应,就会在抗原的相应位置出现显色区带,即可判断HP感染类型。

      1.3  抗体判断  将印迹膜上端起始线与标准带起始线对齐,在对应位置出现带型既可判断为相应的抗体:①128KD﹑116KD出现显色带或128KD单独出现,可同时伴有110KD显色判断为CagA(+)抗体;②95KD﹑91KD出现显色或95KD单独出现,可同时伴有87KD显色带判断为VacA(+)抗体;③66KD出现显色带判断为尿素酶B(UreB)(+)抗体;④30KD出现显色带判断为尿素酶A(UreA)(+)抗体。

      1.4  分析结果  ①CagA或VacA抗体同时阳性或任意一种阳性,为Ⅰ型HP感染;②仅出现尿素酶A和尿素酶B抗体阳性,为Ⅱ型HP感染;③CagA, VacA及Ureas三种抗体阴性,既为HP抗体阴性。

      2  结果

      2.1  227例患儿  HP感染85例,阳性率为37.44%,其中Ⅰ型58例,占68.23%;Ⅱ型27例,占31.76%,见表1。

      表1  227例患儿HP感染结果(略)

      2.2  不同年龄段HP感染情况  见表2。

      表2  1~14岁不同年龄段HP感染情况(略)

      3  讨论
       
      目前临床上根据HP菌株及是否表达相应蛋白将HP分为两种类型:Ⅰ型为产细胞毒素HP菌株,能产生空泡毒素和细胞毒素相关蛋白,其致病力强,能导致广泛的炎症,Ⅱ型为不能产生细胞毒素的HP,不含细胞毒素相关基因A(CagA),不表达VacA毒素和CagA蛋白,这类菌株毒性小,感染后一般仅引起轻度慢性浅表性胃炎而无明显的临床症状[2]。据文献[3,4]报道,CagA蛋白是Ⅰ型HP致病性的标志物,现已确认HP是慢性活动性胃炎﹑消化性溃疡﹑胃黏相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤和胃癌的致病因素。1994年世界卫生组织/国际癌症研究机构(WHO/IARC)将幽门螺杆菌定为Ⅰ型致癌原。HP作为胃癌的Ⅰ类致癌因子,其中CagA与 VacA是在致癌过程中关键的毒力因子。HP穿透粘液层在胃上皮细胞表面定居,对胃上皮细胞和胃粘膜屏障等造成破坏作用,刺激上皮细胞增殖,改变增殖与凋亡的关系。VacA可使上皮细胞空泡样变性﹑损伤﹑坏死及溃疡,CagA本身无细胞毒性,但与VacA的转录等功能有关。另外,我国HP成人感染率已达60%~80%[5],血清学检查绝大部分均为阳性,因此,HP进行分型检测特别重要,能及时指导临床治疗。本文通过免疫印迹法对227例患儿进行CagA、VacA、UreA、UreB抗体检测,结果显示:HP感染85例,阳性率为37.44%,略低于成人感染率[5],而且HP感染率随着年龄增加而增加,与文献[1]报道基本一致。免疫印迹法是一种可靠的诊断HP感染的非入侵性方法,它的特异性和敏感性都较高且方法简单,且能定性分析蛋白质各组分,与其它方法相比,具有操作简单易行不需要昂贵的仪器,安全准确等优点,特别适合不适宜进行胃镜检查或不需要胃镜检查的患者,病人易于接受,及时指导临床治疗并且可用于流行病学调查。

    【参考文献】
        [1] 胡伏莲.幽门螺杆菌感染的流行病学[J].(总97《中国医刊》),2007,42(2):17~18.

      [2] 王蔚虹,胡伏莲.幽门螺杆菌的分子生物学[M].北京:中国科学技术出版社,1997,170.

      [3] 王思平.幽门螺杆菌VacA基因致病机理及胃十二指肠疾病的关系[J].国外医学消化系统疾病分册,1997,17(3):141.

      [4] 张尤力. 幽门螺杆菌VacA基因型和CagA基因及其表达产物[J]. 国外医学消化系统疾病分册,1997,17(3):141.

      [5] 蒋丽蓉,许幼如,张凤富.胃肠病患者幽门螺杆菌感染若干情况的研究[J].中国内镜杂志,1998,4(1):301.

     

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