将少量纯培养接种到一恒定体积的新鲜液体培养基中,适宜条件下培养,定时取样测定细菌含量,以培养时间为横坐标,以细菌数目的对数或生长速率为纵坐标,得繁殖曲线,对单细胞而言,又称生长曲线。
根据生长速率不同,分为几个时期。
(一)延迟期 lag phase(停滞期、调整期)
表现:不立即繁殖,生长速率近于0,菌数几乎不变,细胞形态变大。
特点:分裂迟缓,合成代谢活跃,体积增长快,对外界不良环境敏感。
原因:调整代谢,合成新的酶系和中间代谢产物以适应新环境。
消除:增加接种量;采用最适菌龄接种;培养基成分(种子、发酵)
(二)对数期 log phase
表现:代谢活性最强,几何级数增加,代时最短,生长速率最大。
特点:细菌数目增加与原生质总量增加,与菌液浊度增加呈正相关性。
代时(generation time):单个细胞完成一次分裂所需时间,亦即增加一代所需时间。
G=t1-t0/n y=x•2n n=lgy - lgx/lg2
导出 G = t1 - t0 /3.3(lgy - lgx)
影响G因素:菌种、营养成分、营养物浓度(很低时影响)、培养温度。
(三)稳定期 stationary phase(最高生长期、静止期)
表现:新增殖细胞数与老细胞的死亡数几乎相等,活菌数动态平衡。
特点:生长速率又趋于0,细胞总数最高。
原因:养分减少;有毒代谢物产生。
稳定期细胞内开始积累贮存物,此阶段收获菌体,也是发酵过程积累代谢产物的重要阶段。
延长:补料,调pH、温度等。
此时,菌体总数量与所消耗的营养物之间存在一定关系,称为产量常数(生长效率)。Y = X - X0 /C 其中X-稳定期细胞干重/ml, X0 -接种时干重/ml,C-限制性营养物浓度。
根据这一原理,可进行生物测定。
将未知混合物加到只缺乏特定限制性营养物的完全培养基中,测定培养基所能达到的生长量,就可以计算出原混合物中特定限制性营养物的浓度。
(四)衰亡期 decline phase
表现:出现 “负生长 ”,有些细胞开始自溶。
对于丝状真菌,细胞数目不呈几何级数增加,无对数生长期,一般有调整期,最高生长期,衰退期。
下一篇:连续培养与同步生长