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微生物细胞大小和数量的测定



录入时间:2011-11-17 16:43:36 来源:互联网

一、测定微生物的大小

1. 测定的工具:目镜测微尺    镜台测微尺

2. 目镜测微尺的校正:在高倍镜下,看清镜台测微尺的刻度后,转动目镜,使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行,移动推动器,使目镜测微尺的0点与镜台测微尺的某一刻度重合,然后,仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度。计算两刻度间目镜测微尺的格数和镜台测微尺的格数。由于镜台测微尺的刻度每格长10µm,所以可得:                     

目镜测微尺每格长度( µm)=(镜台测微尺格数×10)/目镜测微尺格数

注意:校正目镜测微尺必须针对特定的显微镜和附件(特定的接物镜、接目镜、镜筒长度等)进行,而且只能在这特定的情况下才可重复使用。

3. 菌体大小的测定:取下镜台测微尺,将细菌染色标本置于载物台上,然后在油镜下用目镜测微尺测量菌体的长和宽。

二、测定微生物数量

方法:活菌计数法——平板菌落计数法;总菌计数法——血球计数板或霍瑟(Peroff  Hausser)细菌计数板(二者原理和部件相同,只是厚薄不同而已)。

本实验用血球计数板计数酵母菌的数量                                                 

1. 取清洁无油的血球计数板,在计数室上面加盖玻片。                                                          

2. 取酵母菌液,摇匀,用滴管由盖玻片边缘滴一小滴,使菌液自行渗入,计数室内不得有气泡。

3. 静止5min后,用低倍镜观察并将计数室移至视野中央。              

4. 在高倍镜下计数:随机计数五个中格的平均值,然后求得每个中格的平均值。乘上16(或25)就得出一大格中的总菌数,最后再换算到每mL菌液中的含菌数。

5. 计算方法:

酵母菌细胞数/mL=[(X1+X2+X3+X4+X5)/5]X 25(或16)X 10 X 1000 x 稀释倍数

6. 注意事项:压在方格线上的菌体,以压在底线和右侧线上的菌体计入本格内;遇到有芽体的酵母时,若芽体和母体同等大,就按单个酵母计数。

7. 计数完毕后,血球计数板要立即清洗干净,并用吸水纸吸干,最后用擦镜纸擦干净,并放回盒内。

 

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