革兰阳性球的菌鉴定Identification of Gram-positivc cocci

( 一) 革兰阳性球菌的基本特征

在血琼脂平板上生长，但在麦康凯、伊红亚甲蓝、中国蓝琼脂平板上不生长，提示为革兰阳性球菌。但有些非发酵菌(如：艾肯菌属、金氏杆菌属、心杆菌属等)在麦康凯平板上也不生长。

( 二) 革兰阳性球菌的基本鉴定试验要求

触酶试验是鉴定革兰阳性球菌的重要试验(任何革兰阳性球菌必须先做触酶试验) ，此试验不宜碰到血琼脂，因为红细胞内含有过氧化物酶，操作过程中若沾染红细胞可造成假阳性。

凝固酶试验是鉴定葡萄球菌的重要试验，此试验有玻片法和试管法。须注意以下几点。

(1 ) 有些葡萄球菌(昂和葡萄球菌、施氏葡萄球菌)凝固酶试验玻片法阳性，试管法验证阴性，因其产生聚集因子。有些金黄色葡萄球菌玻片法阴性，试管法阳性，因该金黄色葡萄球菌无结合凝固酶，有游离凝固酶。

(2) 试验可使用EDTA 抗凝的兔血浆，不能使用枸橼酸盐抗凝，因为有些细菌可分解枸橼酸盐，可出现假阳性。

(3)高盐甘露醇琼脂平板上的菌落不能用于凝固酶试验，因高盐可致菌体自凝。

( 三) 作为推测性鉴定的重要试验

1.菌落特征

(1)溶血： 血平板上的溶血有助于一些细菌的初步鉴定，如金黄色葡萄球菌、链球菌属等。

α 溶血: α溶血使菌落周围的血液部分溶解，其结果是菌落周围有一个草绿色的环，疑似肺炎链球菌和草绿色链球菌。

ß溶血: ß 溶血菌落周围的血液完全溶血，是由于红细胞完全被溶解所致，如A 群ß溶血链球菌(化脓性链球菌)产生宽阔清晰的溶血环；B群ß溶血链球菌(无乳链球菌)和产单核细胞李斯特菌产生一个狭窄的分散溶血环。

(2) 卫星现象: 乏养菌属、Granulicatella elegans

 2 . 镜下形态

(1)革兰阳性球形、葡萄状、单个、成双的疑似葡萄球菌属。

(2) 革兰阳性球状、球杆状、链状(短链)排列、链的长短不一(液体培养基中为长链，固体培养基中为短链，短链由4~8 个细菌组成、长链可达20~30 个)的疑似链球菌属。

(3) 革兰阳性矛头状、成双或短链排列的疑似肺炎链球菌。

(4) 革兰阳性球杆状、成双、链状的疑似乳球菌属、明串珠球菌属、格鲁比卡菌属等。

(5) 革兰阳性球状、球杆状的疑似乏养菌属等。

(6) 革兰阳性球状、成双、链状、成簇的疑似气球菌属、孪生球菌属、创伤球菌属、片球菌属等。

(7)革兰阳性球杆状、成双、四联状的疑似差异球菌属等。

(8) 革兰阳性球状、成双、成簇的疑似口腔球菌属等。

(9) 革兰阳性球状、成簇、四联状的疑似微球菌属等。

注: 溶血孪生球菌扁平的侧面相邻，常是双球状。

3 . 触酶试验

(1)触酶试验阴性的革兰阳性球菌: 金黄色葡萄球菌厌氧亚种、解糖葡萄球菌、链球菌属、肠球菌属、乏养菌属、气球菌属、狡诈球菌属、费克蓝姆菌属 、孪生球菌属、格鲁比卡菌属、创伤球菌属 、Lgnavigranum 、乳球菌属、明串珠球菌属(Leuconostoc) 、足球菌属(Pediococcus) 、Granulicatella 、Tetragenococcus 、Vagococcus 。

(2) 触酶试验阳性的革兰阳性球菌：葡萄球菌属、微球菌属、口腔球菌属、动球菌属、克氏考可菌属、差异球菌属、Rothia mucilaginosa等。

4 . 凝固酶试验凝固酶试验阳性的葡萄球菌：金黄色葡萄球菌金黄色亚种、金黄色葡萄球菌厌氧亚种、施氏葡萄球菌聚集亚种、中间葡萄球菌、S. Lutrae 、猪葡萄球菌（l l % ~89 % 阳'性) 。值得注意的是，如果菌落特征、镜下形态符合葡萄球菌、触酶阴性，应先用准确的方法作凝固酶试验，阳性为金黄色葡萄球菌庆氧亚种，阴性再进一步鉴定。

5 . 高盐甘露醇试验  高盐甘露醇试验阳性的葡萄球菌： 金黄色葡萄球菌。但有报道，少见的葡萄球菌也能分解高盐甘露醇，故应用凝固酶试验验证。

6. CAMP 试验  CAMP 试验阳性的革兰阳性球菌： B 群(无乳)链球菌。

7. 杆菌肽敏感试验  杆菌肽敏感的革兰阳性球菌： A 群链球菌(化脓性链球菌) 。

8. Optochin 试验 Optochin 试验阳性的革兰阳性球菌：肺炎链球菌。

9. 吡咯烷酮芳基酰接酶(PYR)  试验阳性的革兰阳性球菌： 肠球菌、化脓链球菌、草绿色气球菌和某些凝固酶阴性葡萄球菌等。直接取细菌培养物，涂在含有PYR 的纸片上，置35℃孵育5 min ，滴加显色剂若阳性则可显红色，无颜色改变为阴性。

1 0 . 触酶试验   触酶阴性革兰阳性球菌的鉴定

11. 双歧法试验  常见凝固酶阴性葡萄球菌的鉴定

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