纸片琼脂扩散法：

1.基本原理将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种待检菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后会不断地向纸片周围区域扩散，形成递减的梯度浓度，在纸片周围抑菌浓度范围内待检菌的生长被抑制，从而产生透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映检测菌对测定药物的敏感程度，并与该药对待检菌的最低抑菌浓度(MIC)呈负相关，即抑菌圈愈大， MIC 愈小。

2 . 试验方法

 (1)挑取培养18~24 h 纯培养菌落4~5 个。

(2) 接种于3~5 ml 水解酷蛋白(Mueller-Hinton ， M-H 0.5 麦氏单位)肉汤中，经35 ℃培养6~8 h

(3) 用无菌生理盐水或M-H 肉汤校正菌液浊度，使其与标准比浊管的浓度相同(图3 - 49c) 。在15 min 内接种完。

(4) 用无菌棉拭蘸取校正过的菌液，在试管壁上挤压几次，压去多余的菌液，涂布整个M-H 平板表面，再重复两次，每次旋转平板60° ，使整个平板涂布均匀 ，最后用棉拭涂布平板四周边缘。

(5) 涂布菌液的平板于室温中干燥3~5 min 后，用纸片分配器或无菌慑子取药敏纸片，贴于平板表面，并用慑尖轻压一下纸片，使其贴平。每张纸片的间距不小于24 mm ，纸片的中心距平板的边缘不小于15 mm;90 mm直径的平板宜贴6 张药敏纸片。贴完纸片后，应在15 min 内将平板反转。

(6) 将贴好纸片的平板置35℃ 孵育18~24 h 后，用卡尺量取抑菌圈直径。个别菌孵育温度，时间及条件应按照CLSI(Clinical Laboratory Standard Institute) 规定。

3 . 结采判断根据CLSI M100 最新标准将所测抑菌圈的大小，报告为敏感(S) 、中介/ 中敏(1)或耐药(R) 。

4 . 对某些细菌抑菌圈的判读有特殊要求

(1)检测葡萄球菌或肠球菌对苯唑西林和万古霉素的抑菌圈需要用透射光(将平板对着光线) 。肉眼看不见细菌生长，需用放大镜才能发现的细小菌落则可忽略不计。检测葡萄球菌或肠球菌时，在苯唑西林纸片(葡萄球菌) 或万古霉素纸片(肠球菌) 周围的透明抑菌圈内有任何明显的菌落或生长薄膜( 包括针尖样菌落) 则提示耐药。

( 2) 如抑菌圈内有独立生长的菌落，则提示可能有杂菌， 需要重新分离鉴定和药敏试验。此菌落也可能为高频突变耐药株。

(3) 变形杆菌属可蔓延到某些抗生素的抑菌圈内，所以在明显的抑菌圈内有薄膜样爬行生长可忽略不计。

(4) 某些细菌的磺胶类药抑菌圈内可能有微量的细菌生长，可忽略不计，应以外圈为准。

(5) 测试链球菌时应测量生长受抑制区域而不是溶血受抑制区域。

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