病毒的抗体吸附在一种与免疫无关的大颗粒表面,然后与相应的抗原结合,出现明显可见的凝聚反应,颗粒可有不同种类,这里介绍致敏胶乳毛细管凝聚反应。
1.实验材料和用具
(1)特异性抗体致敏胶乳
(2)系统感染病毒的植株和健康植株
(3)0.1M Tris(缓血酸胺)+0.85 %NaCl缓冲液,pH7.4
(4)毛细管、研钵、微量离心管、玻片、胶布、台式离心机
2.实验步骤
(1)取显症叶片,用缓冲液配成1 ∶10和1 ∶20 的悬浮液,5000转离心5分钟备用,同样方法制备健康对照植物的汁液。
(2)致敏胶乳用前摇匀,用毛吸管吸取致敏胶乳,约长1cm。
(3)用已吸取胶乳的毛吸管再吸取病毒悬浮液约长2cm,使抗原与胶乳用量为2 :1,注意两液之间不能有气泡,同样方法做对照。
(4)将毛细管按设计顺序排列在玻片上,用胶布条固定,做好标记,并用滤纸吸去管外多余液体。
(5)在室温下孵育 15-30 分钟,此期间来回颠倒数次,使胶乳和病毒悬浮液充分混合。
(6)解剖镜或低倍显微镜下观察并记载凝聚物生成情况。
记录按五级记载:0 -无凝聚物;1-不易辨别的类似凝聚物;2 -凝聚物小而少;3-凝聚物多;4-凝聚物多而大。2 以上为阳性反应。
上一篇:植物病毒血清学检测—对流免疫电泳
下一篇:植物病毒血清学检测—玻片沉淀反应