把电泳技术与免疫双扩散技术结合起来的方法称为免疫电泳,有不同类型,本试验介绍微量免疫电泳,用于病毒鉴定。
1.实验材料和用具
(1)抗血清
(2)提纯病毒
(3)0.025M磷酸盐缓冲液(PB)、pH7.0,10%NaN3,1.5%SDS,琼脂糖(电泳用)。
(4)载玻片、打孔器、开槽刀片、针头、微量加样器、饭盒、电泳仪和水平电泳槽、25℃温箱。
2.实验步骤
(1)洗净载玻片,泡在乙醇中,使用前取出擦干备用。
(2)用缓冲液配制1%琼脂糖液,煮化后加入0.02%NaN3,80℃水浴中备用。
(3)在微量离心管中将等量的1.5%SDS和提纯病毒混匀,开水浴中煮2-4分钟备用。
(4)用吸管吸取2ml琼脂糖液,加在载玻片上,注意保持液面水平,分布均匀,厚度为2mm,室温下放置10分钟,移入饭盒保湿,继续放置30分钟使其充分凝固。
(5)在凝胶上打孔和开槽,并做正负极记号。
(6)去掉孔内凝胶,在孔中加入SDS处理过的病毒悬浮液,注意不要溢出。
(7)将玻片放入水平电泳槽,以0.025M PB pH7.0为电泳缓冲液,电流量为3-5mA/片,电泳40分钟。
(8)电泳后取出玻片用针将槽内凝胶去掉。
(9)在槽内加入血清,饭盒内保湿,25℃下孵育20-40小时观察沉淀线的形成。
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