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结核病实验室细菌学诊断研究



录入时间:2011-10-28 9:17:34 来源:互联网

         (1)BactecTB460和:BactecTB960分枝杆菌快速培养仪  这是于1977年问世、20世纪90年代初引进我国的BactecTB460分枝杆菌快速培养仪,利用放射性14℃棕榈酸为基底物的7H 12B液体培养基培养结核分枝杆菌(简称MT)时,由于细菌的生长产生放射性C02,其放射性强度与MT的生长相关,检测标本中的MT只需4-25天。此外,在Bactec系统内加入户-硝基-o-乙酰氨基书-羟基苯丙酮(简称NAP)继续培养2+6天后,根据生长指数可初步鉴别MT复合群和非结核分枝杆菌(简称NTM)。Bactec TB460以其简便、快速、可同时报告药敏试验结果的优点,;在国内外已成为结核病诊断的标准参照系统之一。 

    1996年新研制出BactecTB960分枝杆菌全自动快速培养仪功能与BactecTB460相似,但无放射性污染,在专用的7H9培养管中加入含有:RUTHENIUM荧光的底物,当检测标本经前处理接种于该培养管后,如有分枝杆菌存在,其代谢产物激发底物RUTHENIUM产生荧光,经扫描自动显示以生长指数(G1)表示的测定结果。但Bactec仪器价格昂贵,需专门进口厂家的专利液体培养基,费用较高,而难以在普通实验室广泛开展。 

    (2)分枝杆菌L  是分枝杆菌在药物等因素作用下产生的细胞壁缺陷型,常规涂片、培养通常阴性,是分枝杆菌病迁延不愈、难治、复治的重要原因。分枝杆菌L型在体内诱导、体外诱导均获成功,如应用氨苄西林、环丝氨酸、异烟肼、利福平、乙胺丁醇或甘氨酸加溶菌酶等均已得到成功的诱导。在结核病标本中开展L型检查[如涂片、培养和聚合酶链反应(PCR)],可显著提高诊断的阳性率,指导临床进行有效化疗。 

    (3)噬菌体生物扩增法  其原理是活的MT可保护菌体内的噬菌体免受噬菌体杀灭剂作用。先将MTMT噬菌体共同孵育,使噬菌体侵人MT内,再用抗结核药物处理MT,若MT耐药,则细菌能存活,随后加入杀噬菌体药物,位于菌体内部的噬菌体不被杀死。培养后,若有耐药MT存在时会出现噬菌斑。该方法与传统药敏试验方法符合率高,只需3天时间即可直接检测标本,无需特殊仪器,操作简单。 

    (4)噬菌体生物发光法  分枝杆菌噬菌体40或分枝杆菌噬菌体88是在分枝杆菌噬菌体TM4的非必需区插入含虫荧光素酶表达基因Fflux与卡介苗hsp60启动子的融合体。重组噬菌体进入相应的分枝杆菌体内繁殖,同时在hsp60启动子的作用下,Fflux基因表达虫荧光素酶,通过与体外发光系统中的荧光素作用而发光,检测发光的强度即可间接对噬菌体进行定性分析和定量分析,从而检测分枝杆菌活菌数。噬菌体生物发光法对分枝杆菌具有高度的特异性,发光值较高,而对非分枝杆菌的发光值与阴性对照比较差异无显著性;在含抗结核药物的培养基中,噬菌体对耐药株的发光值比对药物敏感株的发光值高。应用该方法检测分枝杆菌和进行药敏试验仅需3天,但不能鉴别致病分枝杆菌与非致病分枝杆菌。 

 

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