摘 要：目的 验证微波炉融化的培养基是否符合微生物限度检查的要求。方法 以2005年版中国药典中的检查方法为依据，检查微波炉融化培养基的灵敏度。结果 微波炉融化培养基生长的菌落数与对照培养基生长的菌落数基本一致，灵敏度检查合格。结论用微波炉融化培养基做微生物限度检查是可行的。

关键词：微波炉融化；培养基；灵敏度；微生物限度检查

装于试管瓶内的成品固体培养基使用前需融化，融化过程中需保证培养基的营养成分不会因过度加热而受影响。宜选用沸水浴或微波炉融化培养基。沸水浴融化培养基相对安全，但装量较大的培养基要融化均匀充分，需延长加热时间。微波炉融化培养基则具有快速的优点。本实验检查了微波炉融化培养基的灵敏度。 

1 材料与仪器 

1.1 仪器设备  仪器名称、型号、厂家见表1。

表1 仪器名称、型号、厂家

1.2  用具

培养皿，三角瓶，吸量管，接种针，试管。

1.3 培养基

营养琼脂培养基(090414)、玫瑰红钠琼脂培养基(090211)、营养肉汤培养基 (080402)、改良马丁培养基 (090203)、改良马丁琼脂培养基(071018)(北京三药科技开发公司)；大豆酪蛋白消化物琼脂培养基 (20081127)、沙氏葡萄糖琼脂培养基 (20090320) (青岛高科园银河澳门官网入口技术公司)。

1.4 试剂

0.9％无菌氯化钠溶液。

1.5 菌种

培养基灵敏度检查所用的菌种传代次数不得超过5代。金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus) [CMCC(B)26003]；大肠埃希菌 (Escherichia coli) [CMCC(B)44102]；枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)[CMCC(B)63501]；白色念珠菌(Candida albicans)[CMCC(F)98001]；黑曲霉(Aspergillus niger) [CMCC(F)98003]。

1.6 菌液制备

接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，30～35℃培养18-24 h；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，23～28℃培养24~48 h。将培养物用0.9％无菌氯化钠溶液制成每1 mL含菌数50～100cfu(菌落形成单位 )的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中，23～28℃培养5～7 d，加入0.9％无菌氯化钠溶液3～5mL，洗脱孢子。然后，用管口装有薄的无菌棉花或纱布，能过滤菌丝的无菌毛细吸管吸出孢子悬液至无菌试管内，用0.9％无菌氯化钠溶液制成每1 mL含孢子50～100 cfu的孢子悬液[2]。具体稀释、计数操作如下。 

取1 mL培养物或孢子悬液加入0.9％无菌氯化钠溶液9 mL中，摇匀，即得10-1菌悬液，取其l mL加入0.9％无菌氯化钠溶液9 mL中，摇匀，即得l0-2菌悬液。依此类推，制得10-3，10-4，10-5，10-6，10-7菌悬液。分别吸取10-4，10-5 或10-6，10-7菌悬液各1 mL加入平皿中，倒入营养琼脂或改良马丁琼脂培养基，凝固后倒置培养。每个稀释级分别制备2个平行平板。白色念珠菌、黑曲霉培养72 h计数；大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌培养48 h计数。每种菌均用每1 mL含菌50～100 cfu的稀释级做培养基灵敏度检查实验。

2 微波炉融化的培养基灵敏度检查

2.1  营养琼脂培养基、大豆酪蛋白消化物琼脂培养基的灵敏度检查

取金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌菌悬液各1 mL，分别注入无菌平皿中，立即倾注由微波炉融化完全并冷却至45℃的营养琼脂培养基、大豆酪蛋白消化物琼脂培养基，每株实验菌平行制备每种培养基2个平皿，混匀，凝固，30～35℃培养48h，计数。同时用相应的对照培养基(培养基灵敏度检查合格，121℃，15 min灭菌，冷却至45℃进行实验 。

2.2  玫瑰红钠琼脂培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基的灵敏度检查

取白色念珠菌、黑曲霉各1 mL，分别注入无菌平皿中，立即倾注由微波炉融化完全并冷却至45℃的玫瑰红钠琼脂培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基，每株实验菌平行制备每种培养基2个平皿，混匀，凝固，20-25℃培养72 h，计数。同时用相应的对照培养基(培养基灵敏度检查合格，121℃，15 min灭菌，冷却至45℃)进行实验。

表2培养计数结果及比值（1）

注：每种培养基的上列数据为微波炉融化，下列数据为121℃，15min灭菌。

表3 培养计数结果及比值（2）

注：同表2

3 结果判断标准

微波炉融化培养基的菌落平均数与对照培养基的菌落平均数的比值大于70％，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致，则判定该培养基灵敏度检查合格，微波炉融化程序符合规定。

4 结果与讨论

各种菌的培养计数结果及验证结论见表2，表3。

从表2、表3可见，微波炉融化的培养基和培养基灵敏度检查合格，并经过121℃，15 min灭菌冷却至45℃的对照培养基检测细菌、霉菌及真菌，计数结果基本一致，比值均大于7O％。表明微波炉融化的培养基灵敏度检查合格，用微波炉融化的培养基进行微生物限度检查是可行的。

参考文献

[1] 汪穗福．微生物检测验证技术[M]．北京：中国医药科技出版社，2005：68—69．

[2] 国家药典委员会．中国药典2005年版二部 川．北京：化学工业出版社，2005：附录ⅪJ．

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