NASBA（nucleic acid sequence-based amplification）是一项持续等温的核酸扩增技术，特别适合于以RNA为模版的扩增，与其它常用禽流感病毒检测方法（病毒培养法、免疫学方法和PCR）相比，具有灵敏度高、特异性强、操作简便等特点。就NASBA的操作原理及其在禽流感病毒检测中的成功应用进行综述。NASBA不仅成为禽流感病毒检测的有力工具，而且对于其它恶性传染病的监测、检测同样具有重要价值和意义。

    常用方法：病毒培养法、免疫学方法和核酸检测方法。
    病毒培养法是广泛应用的实验室检测方法之一，灵敏度高，但操作费时（7~10天），而且对实验室条件的要求也较高。与之相比，免疫学方法相对快速简便，但灵敏度和特异性差。而且抗体检测的结果仅仅说明被检测的禽类或动物曾经感染过禽流感病毒，而不能准确反映当前是否感染或携带病毒，因此，在应用方面具有一定的局限性。特别是目前的家禽大多被注射疫苗免疫，则不能使用该方法进行筛查。核酸检测方法（如PCR）用于AIV的检测，灵敏度高且快速，能够准确反映是否携带病毒，可结合其它检测方法加以进一步判定。与常规PCR相比，荧光实时PCR（realtime PCR）技术检测禽流感病毒，其灵敏度有很大提高，但是对于某些超低病毒载量的样品，仍不能达到检测要求。

    NASBA：NASBA技术检测禽流感病毒NASBA（nucleic acid sequencebased amplification）是一项以核酸为模板的快速等温扩增技术。这项技术特别适用于RNA分子的检测。自2002年首次在国际性刊物上发表了关于应用NASBA技术检测禽流感病毒的论文以来，迄今已成功开发出针对A型禽流感病毒所有亚型（H1-H15）（NASBA-AIV）和特异性针对H5亚型（NASBA-H5）、H7亚型（NASBA-H7）的禽流感病毒的NASBA/ECL检测试剂盒。已正式发表的实验数据显示，NASBA技术比目前商品化的免疫检测试剂盒敏感10~1000倍，比常规PCR方法也敏感许多，与现行的病毒培养的检测方法灵敏度相当。但是，病毒培养通常需要一周以上的时间才能得到结果，而NASBA技术常规仅需要4~6小时就可以准确地得到结果，便于尽早采取防治措施，不仅如此，该技术操作简便，自动化水平高，可以减少人为造成的误差，而且还是一种高通量的方法，可以同时检测50个样本，非常适用于大规模样品的筛查。

    技术原理：NASBA技术使用3种酶（逆转录酶、RNA酶H和T7 RNA聚合酶）以及2条特别设计的寡核苷酸引物：在RNA模板（sense RNA）提取后，经过引物（oligo P1和primer P2）和2次连续逆转录酶反应，在同温度条件下进入线性扩增循环，产物直接为单链反义RNA（anti-sense RNA）。NASBA技术与逆转录（RT）-PCR检测RNA不同。RT-PCR在检测RNA时，必先利用逆转录酶形成cDNA，然后利用温度阶梯进行循环扩增，产物为cDNA，引物次序包含于终产物中。而NASBA技术可直接扩增RNA，是连续等温度扩增，产物为单链RNA，引物次序不包含于终产物中。

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