关键词: 液体染色培养基; 白色假丝酵母茵; 芽管; 厚膜孢子
1 材料
1. 1 菌株来源 白色假丝酵母菌ATCC 14053、ATCC90028、ATCC 64550、ATCC 645 48,热带假丝酵母菌ATCC750,克柔假丝酵母菌ATCC 6258,光滑假丝酵母菌ATCC 2238N L,近平滑假丝酵母茵ATCC 22019均由广州乐通泰公司提供。由甘肃省临床检验中心自门诊和住院患者的痰液、尿液、粪便、分泌物等中分离的假丝酵母菌共146株,其中白色假丝酵母菌132株,热带假丝酵母菌 10株,克柔假丝酵母菌2株,光滑假丝酵母菌2株,均经 API-20CAUX卡鉴定证实。
1.2 液体染色培养基主要试剂 葡萄糖、吐温- 80、尿素等购自上海化工试剂厂,蛋白胨购自广州乐通泰公司。
1.3 正常人血清 医院检验科生化室提供。
2 方法
2.1 菌液准备 将各种假丝酵母菌标准菌株及临床分离株分别接种沙保弱琼脂,
2.2 液体染色培养基配制 选择适合假丝酵母菌生长繁殖的液体沙保弱培养基(100ml 蒸馏水中含葡萄糖
MgSO4 0.
2.3 液体染色培养基与人血清检测芽管对比试验 在无菌试管中分别加入0.5ml液体培养基或人血清,每管加入相应菌液100,置
2.4 厚膜孢子检测 继续培养24~72h后,取菌液于载玻片上,加盖玻片在油镜下观察厚膜孢子。
3 结 果
3.1 液体染色培养基与人血清检测白色假丝酵母菌芽管结果见表1。
表1 液体染色培养基与人血清检测白色假丝酵母菌芽管比较
菌株 |
液体染色培养基 |
人血清 | ||||||
0.5h |
1h |
2h |
3h |
0.5h |
1h |
2h |
3h | |
白色假丝酵母菌ATCC14053 |
5 |
11 |
31 |
47 |
1 |
13 |
15 |
18 |
白色假丝酵母菌ATCC90028 |
3 |
14 |
40 |
63 |
1 |
20 |
46 |
47 |
白色假丝酵母菌ATCC64550 |
5 |
17 |
28 |
30 |
0 |
20 |
22 |
40 |
白色假丝酵母菌ATCC64548 |
2 |
16 |
32 |
40 |
0 |
20 |
22 |
24 |
白色假丝酵母菌 临床分离株1 |
3 |
18 |
30 |
40 |
0 |
23 |
65 |
69 |
白色假丝酵母菌 临床分离株2 |
2 |
24 |
30 |
68 |
0 |
19 |
22 |
23 |
白色假丝酵母菌 临床分离株3 |
3 |
19 |
38 |
66 |
1 |
27 |
40 |
50 |
白色假丝酵母菌 临床分离株4 |
4 |
16 |
24 |
56 |
0 |
14 |
29 |
32 |
芽管发生率(%) |
3.4 |
28.1 |
35.3 |
45.9 |
0.4 |
19.5 |
33.0 |
36.8 |
3.2 液体染色培养基测定芽管的特异性3h内,白色假丝酵母菌标准菌株( 4株) 和临床分离株( 1 3 2株) 均产生芽管,而热带假丝酵母菌、克柔假丝酵母菌及光滑假丝酵母菌标准
菌株和临床分离株均不产生芽管。
3.3 白色假丝酵母菌在液体染色培养基中形成的芽管及厚膜孢子。
4 讨论
本文报告的液体染色培养基适合各种假丝酵母菌生长尤其在温育30min后即可观察到芽管的形成,适合白色假丝酵母菌快速检验。继续培养24~72h,还可观察到白色假丝酵母菌形成厚膜孢子。热带假丝酵母菌、克柔假丝酵母菌光滑假丝酵母菌等在该培养基上3h内不产生芽管,因此该培养基特异性较强。与传统的动物血清法对比,在该培养基中芽管形成较快, 培养基成分为实验室常用的化学试剂,来源、配制均较方便,无病原体存在,比常用的人血清安全,适合基层实验室快速鉴定白色假丝酵母菌。能否利用该培养基对其他假丝酵母菌菌如热带假丝酵母菌、克柔假丝酵母菌等进行辅助鉴定如观察假菌丝形态、尿素分解试验等正在研究中。新鲜配制的培养基效果较好,高压除菌后可用半年。
作者:魏莲花,张俭,邹凤梅,刘刚(甘肃省临床检验中心,兰州730000)
参考文献:
[1]章强强,Vidotto V,Aceattatis G,等.葡萄糖对白色念珠菌芽管形成的影响[J].中国皮肤性病杂志,1998,12 (3):140.141.
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