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    液体染色培养基用于白色假丝酵母菌的鉴定



    录入时间:2011-9-27 15:08:32 来源:维普资讯

          芽管试验是鉴定白色假丝酵母菌的关键试验,传统的芽管检测的试剂多为动物血清。我们研制了一种液体染色培养基,用来检测白色假丝酵母菌的芽管和厚膜孢子,临床应用效果良好,报道如下。

    关键词: 液体染色培养基; 白色假丝酵母茵; 芽管; 厚膜孢子  

    1 材料

    1. 1  菌株来源  白色假丝酵母菌ATCC 14053、ATCC90028、ATCC 64550、ATCC 645 48,热带假丝酵母菌ATCC750,克柔假丝酵母菌ATCC 6258,光滑假丝酵母菌ATCC 2238N L,近平滑假丝酵母茵ATCC 22019均由广州乐通泰公司提供。由甘肃省临床检验中心自门诊和住院患者的痰液、尿液、粪便、分泌物等中分离的假丝酵母菌共146株,其中白色假丝酵母菌132株,热带假丝酵母菌 10株,克柔假丝酵母菌2株,光滑假丝酵母菌2株,均经 API-20CAUX卡鉴定证实。    

    12 液体染色培养基主要试剂 葡萄糖、吐温- 80、尿素等购自上海化工试剂厂,蛋白胨购自广州乐通泰公司。

    13 正常人血清 医院检验科生化室提供。  

    2 方法   

    21  菌液准备  将各种假丝酵母菌标准菌株及临床分离株分别接种沙保弱琼脂,35培养48h,挑取菌落,混匀2ml无菌蒸馏水中,在浊度仪上调整菌液浓度为4个麦氏单位 (8×108m1)。 

    22 液体染色培养基配制 选择适合假丝酵母菌生长繁殖的液体沙保弱培养基(100ml 蒸馏水中含葡萄糖5g,蛋白胨10g ) 作基础1, 在其中添加( NH4) 2 SO4  005g,KH2 PO 4 2 g, 

    MgSO4 005g,CaCl2 005g。在上述培养基中添加刺激厚膜孢子形成的吐温- 80 2.0 g,玉米粉10 g,氯霉素005g,调p H606. 8。高压灭菌后,加入经过滤除菌的1moL 尿素003 ml,贮存备用。接种待测菌并培养后,往菌液中滴加l0 gL美蓝05 ml, 使生成的芽管和厚膜孢子着色,便于镜下观察。 

    23 液体染色培养基与人血清检测芽管对比试验 在无菌试管中分别加入05ml液体培养基或人血清,每管加入相应菌液100,置35温育60、120、180min,分别用加样器取菌液 100至载玻片上,高倍镜下计数100个假丝酵母菌所产生的芽管数。 

    24 厚膜孢子检测 继续培养2472h后,取菌液于载玻片上,加盖玻片在油镜下观察厚膜孢子。  

    3 结 果

    31  液体染色培养基与人血清检测白色假丝酵母菌芽管结果见表1。 

    1  液体染色培养基与人血清检测白色假丝酵母菌芽管比较

     

    菌株

    液体染色培养基

    人血清

    0.5h

    1h

    2h

    3h

    0.5h

    1h

    2h

    3h

    白色假丝酵母菌ATCC14053

    5

    11

    31

    47

    1

    13

    15

    18

    白色假丝酵母菌ATCC90028

    3

    14

    40

    63

    1

    20

    46

    47

    白色假丝酵母菌ATCC64550

    5

    17

    28

    30

    0

    20

    22

    40

    白色假丝酵母菌ATCC64548

    2

    16

    32

    40

    0

    20

    22

    24

    白色假丝酵母菌 临床分离株1

    3

    18

    30

    40

    0

    23

    65

    69

    白色假丝酵母菌 临床分离株2

    2

    24

    30

    68

    0

    19

    22

    23

    白色假丝酵母菌 临床分离株3

    3

    19

    38

    66

    1

    27

    40

    50

    白色假丝酵母菌 临床分离株4

    4

    16

    24

    56

    0

    14

    29

    32

    芽管发生率(%)

    3.4

    28.1

    35.3

    45.9

    0.4

    19.5

    33.0

    36.8

     

    32 液体染色培养基测定芽管的特异性3h内,白色假丝酵母菌标准菌株( 4) 和临床分离株( 1 3 2) 均产生芽管,而热带假丝酵母菌、克柔假丝酵母菌及光滑假丝酵母菌标准

    菌株和临床分离株均不产生芽管。   

    3.3       白色假丝酵母菌在液体染色培养基中形成的芽管及厚膜孢子。  

    4 讨论

    本文报告的液体染色培养基适合各种假丝酵母菌生长尤其在温育30min后即可观察到芽管的形成,适合白色假丝酵母菌快速检验。继续培养2472h,还可观察到白色假丝酵母菌形成厚膜孢子。热带假丝酵母菌、克柔假丝酵母菌光滑假丝酵母菌等在该培养基上3h内不产生芽管,因此该培养基特异性较强。与传统的动物血清法对比,在该培养基中芽管形成较快, 培养基成分为实验室常用的化学试剂,来源、配制均较方便,无病原体存在,比常用的人血清安全,适合基层实验室快速鉴定白色假丝酵母菌。能否利用该培养基对其他假丝酵母菌菌如热带假丝酵母菌、克柔假丝酵母菌等进行辅助鉴定如观察假菌丝形态、尿素分解试验等正在研究中。新鲜配制的培养基效果较好,高压除菌后可用半年。 

    作者:魏莲花,张俭,邹凤梅,刘刚(甘肃省临床检验中心,兰州730000)  

    参考文献: 

    [1]章强强,Vidotto V,Aceattatis G,等.葡萄糖对白色念珠菌芽管形成的影响[J].中国皮肤性病杂志,1998,12 (3):140141    

     

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