银河澳门官网入口,银河集团网址登录

银河澳门官网入口,银河集团网址登录

中文版  |   English  |   加入收藏  |   客服热线:400-0532-596
微生物技术资料
文章检索

真菌染色新方法的探索



录入时间:2011-9-26 17:29:26 来源:百度文库

    [摘  要] 目的:探索一种真菌染色新方法。方法:对传统染色法与改良染色法进行比较。结果:传统染色法镜下所见,菌丝体与孢子分离,底影不干净,影响观察;改良染色法使真菌孢子不易脱落,菌丝和孢子能保持自然形态,染色干净、清晰。结论:本方法简单、易掌握,非常适用于实验室大批量制片。

  [关键词] 真菌菌种;盖玻片;棉兰染色液

  真菌的种类很多,在自然界分布极广,它的形态结构复杂,菌丝体和孢子的形态特征随真菌种类不同而异,是鉴别真菌的重要依据。传统的真菌染色方法,常常造成真菌孢子脱落,从而改变了它原有的形态构造,影响观察、鉴定[1]。我们经多次反复摸索,利用真菌菌丝体呈上耸向空间生长特征,用插片法使菌丝体生长在盖玻片上,这样制作的真菌染色片效果更为理想,在以往的文献中还未见报道。现将本方法报道如下。

  1  材料与方法

  1.1  菌种 

  青霉菌、黑曲菌、黄曲菌、毛霉菌、石膏样小孢子菌、絮状表皮癣菌等,以上菌种均为本实验室保存提供。

  1.2  染液的配制染液 

  苯酚(结晶品)20 g,乳酸20 ml,甘油40 ml,棉兰(Cotton blue)0.05 g,蒸馏水20 ml,将苯酚、乳酸、甘油溶解于蒸馏水中(可微加热),再加入棉兰,摇匀,备用。

  1.3  沙氏培养基的制备

  蛋白胨10 g,葡萄糖40 g,琼脂1 g,蒸馏水1 000 ml,68.95 kPa,20 min,备用[2]。

  1.4  方法

  1.4.1  设试验组与对照组两组,各染片100张。试验组即改良的真菌染色法[4],将沙氏培养基倾注大平板,取无菌盖玻片沾上融化的沙氏培养基,密集竖立插在大平板上,将上述菌种用灭菌蒸馏水轻轻刮下,滴在大平板上,并轻轻摇动,使之均匀分布于平板表面,盖上平板盖,于25 ℃~28 ℃湿盒孵育,72 h取出后,用镊子轻轻取出盖玻片,用火焰固定或自然晾干后,滴上棉兰染色液,2 h~3 h后,于水中轻柔漂洗,然后晾干,放载玻片上封片。对照组即传统的真菌染色法,在无菌载玻片上滴加融化的沙氏培养基1滴~2滴,将菌种接种在沙氏培养基上,加盖无菌盖玻片,于25 ℃~28 ℃湿盒孵育,72 h取出后,揭开盖玻片,滴加染液,使真菌培养物与棉兰染液混合染色[3]。

    4.2  染色效果评判标准 

  优片:镜下观察可见真菌菌丝体和孢子形态保持自然完整,孢子基本没有脱落,底影干净、清晰;良片:在镜下观察可见大部分菌丝与孢子形态较为完整、有少许脱落、底影较脏;差片:在镜下观察可见孢子与菌丝分离、脱落、底影脏,形态不完整。

  2  结果

  试验组:染片100张属优片有80张,良片有10张,差片有10张;对照组:染片100张属优片有10张,良片有10张,差片有80张。两组优片率比较差异有统计学意义(P<0.01)。

  3  讨论

  两种不同染色方法的结果比较,可以看出制片效果有以下明显差异:传统法由于菌种接种在载玻片琼脂培养,棉兰液染色时,染料挂有琼脂,镜下可见底影脏,影响检测效果;改良法是直接滴加棉兰染液在盖玻片上进行染色,这样有效减少杂质的干扰,提高底影洁净度,镜下可见干净、清晰;传统法掀开盖玻片,容易使孢子与菌丝分离、脱落;改良法是利用真菌菌丝体和孢子向上生长构造,菌丝体和孢子生长在盖玻片上,使真菌形态保持自然完整。我们经多次反复实践证明,本法简单、易掌握,效果好并适合大批量快速制片,不失为一种真菌染色的新方法。

  参考文献:

  [1]张子康,何光泽,等.医学微生物学与免疫学实验教程[M].第1版.四川:四川科学技术出版社,1989:7.

  [2]陆德源.医学微生物学[M].第5版.北京:人民卫生出版社,2002,11(5).

  [3]凌启波,梁英杰.常见真菌的形态学特征和常用染色方法[J].临床与实验病理学杂志,2003,10:19.

  [4]陈倪勇,肖永波.介绍一种真菌的方法[J].中华病理学杂志,2001,10.

 

上一篇:紫杉醇产生菌的生物多样性

下一篇:液体染色培养基用于白色假丝酵母菌的鉴定

首页 | 关于我们 | 网上商城 | 在线客服 | shchuhu.com
业务联系电话
   400-0532-596 0532-66087773
   0532-66087762 0532-81935169
邮箱:qdhbywg@vip.126.com
地址:青岛市城阳区锦汇路1号A2栋
产品技术咨询
  工作日(周一至周六8:00-18:00):
  18562658263 13176865511
  其它时段:13105190021
投诉与建议:13105190021 13006536294