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植物组织培养材料的采集



录入时间:2011-9-20 11:01:31 来源:百度百科

 

培养材料采集

要根据培养目的适当选取材料,选择原则:易于诱导、带菌少。要选取植物组织内部无菌的材料。这一方面要从健壮的植株上取材料,不要取有伤口的或有病虫的材料。另一方面要在晴天,最好是中午或下午取材料,决不要在雨天、阴天或露水未干时取材料。因为健壮的植株和晴天光合呼吸旺盛的组织,有自身消毒作用,这种组织一般是无菌的。

培养材料的消毒  

从外界或室内选取的植物材料,都不同程度地带有各种微生物。这些污染源一旦带人培养基,便会造成培养基污染。因此,植物材料必须经严格的表面灭菌处理,再经无菌操作手续接到培养基上。  

试剂   

· 乙醇。   

· 吲哚乙酸( IAA) 或 2 ,4 D (生长素类似物)。   

· 氯化汞(升汞)或次氯酸钠。   

· 6- 苄基氨基腺嘌呤( 6-BA )   

· MS 培养基  

·0.1 mol/L NaOH 0.1 mol/L HCl   

配制培养基   

1 )愈伤组织诱导培养基: MS 培养基(蔗糖含量为 10 g/L , 2,4 D 含量为 2 mg/L ,琼脂 10 g/L )。   

2 )试验培养基:在 MS 培养基中加入 IAA 6BA 。   

吲哚乙酸(IAA)先用少量 0.1 mol/L NaOH 溶解, 6- 苄基氨基腺嘌呤先用少量 0.1 mol/L HCl 溶解,然后用蒸馏水稀释,再加入培养基中。   

仪器设备   培养室,高压灭菌锅,水浴锅,解剖刀,三角烧瓶( 100mL ),烧杯,量筒,培养皿,棉线,接种箱或超净工作台,分析天平,长镊子,剪刀,容量瓶,移液管,牛皮纸。   

培养基灭菌   将配好的培养基加入琼脂加热溶解,调至 pH 5.8 ,趁热分装于 100 mL 三角烧瓶中,每瓶约 20 mL 。待培养基冷却凝固后,用一层称量纸和一层牛皮纸包扎瓶(管)口,并用棉线扎牢,然后在高压灭菌锅中 121 ℃( 1 kg/cm 2 )下灭菌 20 min 。取出三角烧瓶放在台子上,冷却后备用。接种操作所需的一切用具(如长镊子、解剖刀、剪刀等)及灭菌水,需同时灭菌。

 

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