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伪狂犬病病毒



录入时间:2011-8-12 9:18:20 来源:动物微生物学

 

伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus)又称猪疱疹病毒Ⅰ型,属于疱疹病毒科(Herpesviridae)疱疹病毒甲亚科(Alphaherpesvirinae)。它是引起多种家畜和野生动物以发热、奇痒及脑脊髓炎为主要症状的一种疱疹病毒。由于本病的临床症状同狂犬病有类似之处,曾被误认为狂犬病,后来才起用了“伪狂犬病”这一病名。本病广泛分布于世界各地。

一、生物学特性

本病毒呈圆形或椭圆形,为双股DNA,20面体立体对称,位于核心无囊膜的病毒粒子直径约110150nm,位于胞浆内带囊膜的成熟病毒粒子的直径约180nm。衣壳壳粒的长度约12nm、宽9nm,其空心部分的直径约4nm.

二、抵抗力

本病毒是疱疹病毒中抵抗力比较强的一种,在畜舍内干草上的病毒,夏季存活30d,冬季达46d。病毒在pH49之间保持稳定。在50%甘油盐水中保存的病料06℃下154d感染力仅轻度下降,保存到3年时仍具感染力。

三、抗原性

伪狂犬病病毒只有一个血清型,但毒株之间的毒力有强弱之分。本病毒与人的单纯疱疹病毒、马立克氏病病毒有微弱的交叉反应。病毒颗粒表面没有血凝素抗原。

四、培养特性

(一)鸡胚培养  病毒可通过多种途径感染鸡胚,适应后很容易连续传代。鸡胚感染后约4d,绒毛尿囊膜上产生灰白色痘样病变,迅速侵入中枢神经系统的所有部分,导致胚胎的头盖部突起。

(二)细胞培养  本病毒可在鸡胚成纤维细胞,猪、绵羊、牛、兔、狗、猫、猴和马的肾原代细胞,猪和牛的睾丸原代细胞,以及Hela、Hep-2、PK-15、BHK-21等传代细胞中增殖。以猪、兔、狗的细胞和鸡胚成纤维细胞最为敏感。感染细胞变圆,形成合胞体。毒株的毒力越强,合胞体形成越多。

五、致病性

本病毒可感染多种家畜、禽类及野生动物,引起发热,剧烈发痒和急性脑脊髓炎症状。本病毒对小猪危害最严重,成年猪症状轻微,死亡很少,并常成为隐性带毒者。猪不发生瘙痒,但母猪流产,产仔减少。不足15d的仔猪,通常在出现症状后1224h内死亡。本病造成的损失与年龄成负相关性,成年猪很少死亡,而仔猪的死亡率可达到100%。

牛患病后在皮肤的某部位出现狂痒是本病的基本特征。狗和猫的症状与牛相似,但不攻击人和其他动物,常在出现症状后2436h死亡。山羊无瘙痒症状,主要表现不安、大量出汗、后期出现痉挛和麻痹。多在2448h内死亡。人可能具有某种程度的易感性。

六、微生物学诊断

(一)病毒分离  在病的急性期,用棉拭子在口咽部取样。病死动物取扁桃体、颈淋巴结和鼻粘膜。收集局部水肿液和该区域的神经干。部分采集脊髓和脑(最好是中脑、脑桥和延脑)。

1.鸡胚接种  本病毒可适应鸡胚,接种4d后,在绒毛尿囊膜上可见白色痘斑性病变,并迅速侵袭整个神经系统,导致胚胎头盖骨突起。

2.动物接种  病料皮下接种兔,能产生典型的瘙痒症状,2d后兔舐接种部位,以后更狂暴,啃咬皮肤。症状持续46h,兔卧地不起,阵发性痉挛和呼吸困难死亡。经兔接种后的材料则可感染豚鼠和小白鼠,引起瘙痒症状。

3.细胞培养  猪肾传代细胞系(如PK-15)以及猪、兔和牛的原代肾细胞培养最适于病毒的分离培养。将待检的脑组织或扁桃体研磨成浆,用Hanks液或PBS液稀释成10%悬液,经2000rmin离心10min,取上清,接种长成单层的细胞培养液内,37吸附1h,加维持液继续培养。病变出现时间与样品中病毒含量多少有关,最早可在接种后18h出现细胞病变,晚的则在96h以后,一般在接种后48h。此时,将细胞培养物作苏木紫—伊红染色,镜检可见嗜酸性核内包涵体。据报道,兔肾细胞培养对本病毒特别易感,高于鸡胚和实验动物。

(二)血清学检查

1.血清中和试验  一般用乳兔肾细胞或PK-15细胞。病毒滴度不低于105TCID500.1ml,使用滴度在100500TCID50范围内。被检血清作倍比稀释。血清中和效价在1:2时可疑,1:4时为阳性。

2ELISA试验  某些国家已把ELISA(间接法)作为诊断该病的标准方法。但该病毒的抗体与牛疱疹病毒Ⅰ型抗体有交叉反应。在同等条件下,用已接种病毒和空白细胞培养物分别制备病毒抗原和对照细胞抗原。如被检血清在病毒抗原孔的吸收值较对照孔高0.15以上者判为阳性。

3.荧光抗体试验  采取新鲜病料,做冰冻切片进行荧光抗体染色(间接法)检查,该法比病毒分离更快速。

4.琼脂扩散试验  抗原用PK-15细胞系生产制备,待检猪血清不稀释,25左右1418h即可判定。但该方法尚需在实践中进一步验证。

七、免疫与治疗

本病尚无有效药物治疗,紧急情况下用高免血清治疗,可降低死亡率。目前针对该病的弱毒苗、弱毒灭活苗、野毒灭活苗及基因缺失苗已研制成功,在许多流行地区应用,能有效减缓猪感染后的临床症状,大大降低本病的发生,减少经济损失。但靠疫苗接种不能消灭本病,一般无本病猪场禁用疫苗。还有研究证明,当猪同时接种两种不同的基因缺失疫苗后,病毒会发生基因重组现象,因此在同一个动物体中只准使用一种基因缺失苗,以避免疫苗毒株间的重组。

 

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