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霉菌标本制备及形态观察



录入时间:2011-8-11 9:12:47 来源:百度

 

目的要求

学习霉菌的标本制备方法,观察根霉、毛霉、青霉、曲霉、白地霉的形态构造。

材料

1. 菌种:白地霉(Ceotrichum candidum)摇瓶培养液;根霉(Rhizopus sp.)、毛霉(Mucorsp.)、曲霉(Aspergillus sp.)、青霉(Penicillium sp.)平板。

2. 染料:乳酸石炭酸棉蓝液。

3. 其他:显微镜、载玻片、盖玻片、接种环、解剖针、培养皿、玻璃棒、滤纸、20%甘油。

原理

霉菌菌丝较大,细胞容易收缩变形,孢子容易飞散,在制备霉菌标本时,常用乳酸石炭酸溶液作为介质,具有不使细胞变形,可杀菌防腐,不易干燥,能保持较长时间等优点,若加入棉蓝,又具有一定染色效果。

霉菌的有些结构在制片过程中易被破坏,影响观察,可采用载玻片培养法。此法便于直接显微镜下观察,尤其适用于根霉的假根,曲霉的足细胞及分生孢子链等结构的生长情况的观察,并且还可在同一标本上观察到微生物发育的不同阶段的形态。

方法

1.白地霉的观察

取一块干净的载玻片,加一滴白地霉培养液,加盖玻片制成水浸标本片,在显微镜下观察白地霉菌丝及节孢子的形态。

2.其他霉菌观察

1)一般观察法:加一滴乳酸石炭酸棉蓝液于洁净的载玻片中央,用解剖针从菌落的边缘处挑取少量带有孢子的菌丝,放入乳酸石炭酸棉蓝液中,再细心地把菌丝挑散开,加盖玻片,注意不要有气泡产生。置于显微镜下观察,菌丝呈蓝色,颜色的深度随菌龄的增加而减弱。

观察根霉时,注意观察其菌丝(无横隔)、假根、孢子囊柄(与假根相对着生)、孢子囊、囊轴、囊托、孢子囊孢子及厚垣孢子。

观察毛霉时,注意观察其菌丝(无横隔)、孢子囊柄、囊轴、孢子囊孢子及厚垣孢子。

观察曲霉时,注意观察其菌丝(有横隔)、足细胞,分生孢子梗、顶囊、小梗(形状、层数及在顶囊上的着生情况),分生孢子的着生情况。

观察青霉时,注意观察其菌丝(有横隔),分生孢子梗,带状枝(小梗的轮数及对称性),分生孢子的着生情况。

2)载玻片培养法:

①湿室准备:在培养皿底部先放一张圆形滤纸,在滤纸上依次放上“Z”型玻璃棒、载玻片和盖玻片(两片),盖上培养皿盖,用纸包扎好,高压(9.8×104Pa)灭菌20分钟。

②用接种环挑取少量霉菌孢子,置于湿室的载玻片的中央,用无菌滴管滴加少量冷却至45左右的察氏培养基。

③将镊子在火焰上灼烧灭菌后,取无菌盖玻片盖在培养基上,然后轻轻压一下。用滴管取融化的石蜡将盖玻片的三边密封,如图19-1-1)所示。

④将35m1 20%甘油倒于湿室内,以保持湿度,如图19-1-2),将培养皿置于28恒温箱中培养2天。

⑤将培养好的载玻片取出,置于显微镜下观察。

 

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