目的要求

学习霉菌的标本制备方法，观察根霉、毛霉、青霉、曲霉、白地霉的形态构造。

材料

1. 菌种：白地霉（Ceotrichum candidum）摇瓶培养液；根霉（Rhizopus sp．）、毛霉（Mucorsp．）、曲霉（Aspergillus sp．）、青霉（Penicilli—um sp.）平板。

2. 染料：乳酸石炭酸棉蓝液。

3. 其他：显微镜、载玻片、盖玻片、接种环、解剖针、培养皿、玻璃棒、滤纸、20％甘油。

原理

霉菌菌丝较大，细胞容易收缩变形，孢子容易飞散，在制备霉菌标本时，常用乳酸石炭酸溶液作为介质，具有不使细胞变形，可杀菌防腐，不易干燥，能保持较长时间等优点，若加入棉蓝，又具有一定染色效果。

霉菌的有些结构在制片过程中易被破坏，影响观察，可采用载玻片培养法。此法便于直接显微镜下观察，尤其适用于根霉的假根，曲霉的足细胞及分生孢子链等结构的生长情况的观察，并且还可在同一标本上观察到微生物发育的不同阶段的形态。

方法

1．白地霉的观察

取一块干净的载玻片，加一滴白地霉培养液，加盖玻片制成水浸标本片，在显微镜下观察白地霉菌丝及节孢子的形态。

2．其他霉菌观察

（1）一般观察法：加一滴乳酸石炭酸棉蓝液于洁净的载玻片中央，用解剖针从菌落的边缘处挑取少量带有孢子的菌丝，放入乳酸石炭酸棉蓝液中，再细心地把菌丝挑散开，加盖玻片，注意不要有气泡产生。置于显微镜下观察，菌丝呈蓝色，颜色的深度随菌龄的增加而减弱。

观察根霉时，注意观察其菌丝（无横隔）、假根、孢子囊柄（与假根相对着生）、孢子囊、囊轴、囊托、孢子囊孢子及厚垣孢子。

观察毛霉时，注意观察其菌丝（无横隔）、孢子囊柄、囊轴、孢子囊孢子及厚垣孢子。

观察曲霉时，注意观察其菌丝（有横隔）、足细胞，分生孢子梗、顶囊、小梗（形状、层数及在顶囊上的着生情况），分生孢子的着生情况。

观察青霉时，注意观察其菌丝（有横隔），分生孢子梗，带状枝（小梗的轮数及对称性），分生孢子的着生情况。

（2）载玻片培养法：

①湿室准备：在培养皿底部先放一张圆形滤纸，在滤纸上依次放上“Z”型玻璃棒、载玻片和盖玻片（两片），盖上培养皿盖，用纸包扎好，高压（9.8×10⁴Pa）灭菌20分钟。

②用接种环挑取少量霉菌孢子，置于湿室的载玻片的中央，用无菌滴管滴加少量冷却至45℃左右的察氏培养基。

③将镊子在火焰上灼烧灭菌后，取无菌盖玻片盖在培养基上，然后轻轻压一下。用滴管取融化的石蜡将盖玻片的三边密封，如图19-1-（1）所示。

④将3～5m1 20％甘油倒于湿室内，以保持湿度，如图19-1-（2），将培养皿置于28℃恒温箱中培养2天。

⑤将培养好的载玻片取出，置于显微镜下观察。

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