目的要求

1. 通过观察了解酵母细胞的形态结构。

2. 掌握鉴别酵母细胞死活的染色方法。

材料

1. 菌种：酵母菌菌悬液。

2. 染料：0.1％美兰染色液。

3. 其他：显微镜、载玻片、盖玻片、滴管、试管、蒸馏水等。

原理

酵母菌细胞较大，不必染色即可用显微镜观察其形态。

用美兰染色液可对酵母细胞进行死活染色鉴别。美兰是一种弱氧化剂，氧化态呈蓝色，还原态呈无色。活的酵母细胞，因新陈代谢的不断进行，具有一定的还原能力，能将进入细胞的美兰还原，而细胞不被染色。因此，用美兰对酵母细胞染色一定时间后，无色的为活细胞，呈蓝色的则为死亡细胞。需要注意的是，一个活酵母菌的还原能力是一定的，必须严格控制染料的浓度和染色时间。

方法

1．酵母菌细胞形态的观察

取洁净的载玻片一块，用滴管取酵母菌悬滴于载玻片中央，取盖玻片一块，小心地将盖玻片一端与菌液接触，然后缓慢地将盖玻片放下，以避免产生气泡。至此，一片酵母菌水浸标本片就制成了。

先用低倍镜观察，再用高倍镜观察，观察时注意酵母细胞的形状及出芽情况。

2．死活酵母细胞的染色鉴别

取0.1％美兰液一滴，滴在一块洁净的载玻片中央，加一滴酵母菌悬液，混合均匀，染色3～5分钟后加盖玻片制成水浸标本片，镜检。

内容

1. 制片观察所给各种酵母菌的细胞形态。

2. 用美兰液对酵母菌死活细胞进行染色鉴别。

结果与思考题

1. 绘图表示所观察的各种酵母菌，注明菌名及放大倍数。

2. 用美兰对酵母细胞进行染色鉴别时，为什么要控制染料的浓度和染色时间?

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