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雅致放射毛霉5L发酵罐发酵实验



录入时间:2011-8-1 14:29:06 来源:互联网

 
一、实验目的:掌握发酵罐的操作技能,学习微生物在发酵罐上发酵的过程和实验方法。
二、仪器
分光光度计、电热恒温水浴锅、生物发酵智能控制系统。
三、试剂
1、DNS试剂:取6.3g3,5-二硝基水杨酸(DNS)和262mL2mol/LNaOH溶液加到酒石酸钾钠的热溶液中(192g酒石酸钾钠溶于500 mL水中),再加5g重蒸酚和5g亚硫酸钠,搅拌使其溶解,冷却后加水定容至1000mL,保存于棕色瓶中放置7天后使用。
2、10 g/L酪素溶液
3、种子培养基
4、产酶培养基
 
四、实验方法
1、学习发酵罐的使用方法。
2、发酵罐中加入培养基,灭菌。
3、接种、培养。
4、测定酶活:
a. 先将酪素溶液放入(40±0.2)摄氏度恒温水域中,预热5 min;
b. 按下列程序操作:
试管A(空白)   (第二试管)            试管B(酶试样,作三个平行样)(第三试管)
     ↓                                                          ↓
加酶液2.00 mL       (移液管2ml)             加酶液2.00 mL
     ↓(40±0.2℃),2 min                             ↓(40±0.2℃),2 min
加三氯乙酸4.00 mL(摇匀)(移液管5ml)         加酪素2.00 mL(摇匀)
    ↓(40±0.2℃),10 min                            ↓(40±0.2℃),10 min      
加酪素2.00 mL(摇匀)(移液管2ml)         加三氯乙酸4.00 mL(摇匀)
↓                                                                  ↓
取出静止10 min,过滤 (第四试管,小漏斗)  取出静止10 min,过滤
↓                                                                  ↓
在275 nm波长下,用 10 mm                   在275 nm波长下,用 10 mm
比色皿测其吸光度                             比色皿测其吸光度
 
(5)计算(=135)
X=A×K×8/2×1/10×n×E=2/5×A×K×n×E
式中  X——样品的酶活力(u/g)      A——试样溶液的平均吸光度
K——吸光常数(K=135)       8——反应试剂的总体积(mL)
2——吸取酶液2.00 mL,以1 mL计    1/10——反应时间10 min,以1 min计
n——稀释倍数                 E——紫外法与福林法的换算系数(取0.50)
 
五、实验进程安排及结果分析
   (1)第1次实验:在实验老师准备的已灭菌培养基和罐体的前提下,观察罐上接种。同时熟悉罐的结构及每一部件用途。
   (2)第2次实验:在下摇瓶测定发酵液中蛋白酶活力的同时,每位同学在发酵罐上取样,测定发酵液中蛋白酶活力。

 

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