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工业微生物的筛选和紫外诱变育种



录入时间:2011-8-1 14:24:16 来源:互联网

       一.实验目的:加深对发酵工程上游技术中菌种选育的认识;学会常规选种和育种的方法,树立科学认真仔细的态度,培养科研协作精神。

二、实验原理:根据一定的生产目的如抗生素或酶类的生产,建立不同的筛选模型,并从特定的样品如土壤中筛选出高产适宜的菌株。

三.培养基及仪器:

降解亚硝酸盐培养基:NaNO2 0.2%,KH2PO4 0.7%,MnSO4.H2O 0.25%,Na2HPO4 1.35%,MgSO4.7H2O 0.1%,葡萄糖1%,琼脂2%,0.1MPa灭菌20分钟。6250ml三角瓶,各装100ml培养基。

同时灭菌试管20支,1ml吸管12支,普通平皿60个,灭菌生理盐水。培养亚硝酸盐降解菌发酵液1瓶,每位同学准备1个斜面。

3.洁净工作台、培养箱、三角瓶、曲玻棒、平皿。

四.操作方法

课前半小时打开超净工作台灭菌。

1.土壤中降解亚硝酸盐细菌的筛选分离

稀释土样。5g土样,加入45ml无菌水中。为10-1,然后取1ml加入9ml无菌水,为稀释10-2,直至稀释至10-8溶化培养基。

将溶化后不烫手的培养基倒入平皿,刚好盖过平皿底部,迅速摇匀后放置,使培养基冷却,要求平皿培养基表面平整、光滑。吸取10-4,10-510-6相应浓度的土样稀释液0.5ml,加入平皿内,用烧过灭菌的曲玻棒均匀涂平,放入37培养箱中倒置培养48小时。

2.亚硝酸盐分解菌的紫外诱变育种

10ml培养好的液体培养液,放入90 mm培养皿,将皿放置于诱变箱的磁力搅拌器上,置于30 W 紫外灯下,照射90 s,用无菌生理盐水稀释至10-6,10-7,10-8,按常规方法涂布筛选平板。

同学可自行选择培养亚硝酸盐降解菌和诱变菌。每位同学做一个平皿。并标记好稀释度、种类和名字。

五、实验进程安排及结果分析

1)第1次实验:稀释土样,倒平板,冷却后进行平板涂布,放入恒温培养箱中;或进行菌种诱变,稀释诱变菌,倒平板,冷却后进行平板涂布,放入恒温培养箱中。然后紧接着进行第二个实验。

2)第二次实验:同学回到实验室中,记录实验结果。培养24-48h后,记录观察到的菌落数量。并对其中2-5个不同菌落进行形态描述。挑取其中1个菌落,接入斜面培养基进行菌种保藏。

 

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