以秋石斛兰优良种质,利用新芽为外植体,采用独特的培养基进行丛生芽增殖并获得优质种苗,其特征在于该方法包括以下步骤:
1).材料:秋石斛兰优良种质;
2).外植体的消毒:取秋石斛兰当年生具5-6个节的嫩芽,去除叶片后,用水冲洗干净后剪成两段,在超净工作台上用70%的酒精浸泡1分钟,再用0.1%升汞溶液灭菌10分钟,无菌水冲洗5次后,用无菌吸水纸吸干,剪取2-3厘米带节的茎段和茎尖,接种到原球茎和丛生芽诱导培养基上;
3).原球茎和丛生芽的诱导:诱导培养基为MS+6-苄基嘌呤1-5毫克/升+萘乙酸 0.2-0.5毫克/升+15%椰子水培养基上,在培养温度26±2℃条件下,10天茎尖开始生长,20天左右茎段节上有新芽形成并生长,当6-苄基嘌呤为4-5时新芽基部有原球茎产生,培养基含蔗糖30克/升,pH5.5-5.8,琼脂0.7%;
4).丛生芽增殖:将利用茎段和茎尖培养得到的丛生芽,剪去部分叶片转移到丛生芽增殖培养基:MS+6-苄基嘌呤1-5毫克/升+萘乙酸0.2-0.5毫克/升+15%椰子水,能诱导原球茎和丛生芽形成,原球茎能在较高的6-苄基嘌呤浓度培养基上增殖,原球茎转入较低6- 苄基嘌呤浓度的培养基时会分化出丛生芽,丛生芽在较低6-苄基嘌呤浓度的培养基上能增殖;
5).生根壮苗培养:丛生芽增殖多代后,可将丛生芽切割成单个芽,接种在1/2MS 培养基+萘乙酸0.5-1.0毫克/升+香蕉汁100克/升+活性碳0.5克/升的生根壮苗培养基上进行生根壮苗培养,40天能形成株高3-4厘米的完整植株;
6).试管苗移栽:试管苗移栽时,在自然光照下炼苗5-10天,将秋石斛兰小苗从玻璃瓶中取出,洗净根部的培养基,在0.1%的高锰酸钾溶液中浸泡5分钟后凉干,以小塑料盆为栽培容器,以浸泡过的泥炭藓为栽培基质,保持适当通风和足够的湿度,冬季时采用温室种植,温度维持在15℃以上。
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