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多管发酵法测定水中大肠菌群



录入时间:2011-7-13 14:11:16 来源:互联网

 
一、目的要求 
1.学习测定水中大肠菌群数量的多管发酵法;
2.了解大肠菌群的数量在饮水中的重要性。
 
二、基本原理 
多管发酵法包括初(步)发酵试验、平板分离和复发酵试验。 
初(步)发酵试验:利用大肠菌群能发酵乳糖而产酸产气的原理,但初发酵管24h内产酸产气和48h产酸产气的均需进行平板分离。
平板分离:采用伊红美蓝琼脂平板,使大肠菌群产生带核心的、有金属光泽的深紫色菌落。 
复发酵试验:以上阳性菌落,经染色为革兰氏阴性无芽孢菌者,再次进行初发酵试验,经24h培养产酸产气的,最终确定为大肠菌群阳性结果。
 
三、器材 
1、培养基:乳糖蛋白胨发酵管(内有倒置小套管),三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管(瓶)(内有倒置小套管),伊红美蓝琼脂平板,灭菌水。
2、仪器或其他用具:载玻片,灭菌带玻璃塞空瓶,灭菌吸管,灭菌试管等。
 
四、操作步骤 
1.水样的采取
2.自来水检查 
(1)初(步)发酵实验 
将水样分别接入三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管(瓶)中,37℃培养24h,24h未产气的继续培养48h。
(2)平板分离
将经24h和48h培养后产酸产气的发酵管(瓶),分别划线接种于伊红美蓝琼脂平板上,再于37℃培养18~24h,将符合下列特征的菌落进行染色镜检。
深紫黑色,有金属光泽; 
紫黑色,不带或略带金属光泽; 
淡紫红色,中心颜色较深。 
(3)复发酵试验
将镜检为革兰氏阴性无芽孢菌的菌株重复初步发酵试验。并根据初发酵管试验的阳性管(瓶)查表1,即得大肠菌群数。
3.池水、河水或湖水等的检查 
分别将100ml、10ml、1ml原水样和经稀释成10-1、10-2的水样重复上述自来水的检查,其中100、10、1、10-1ml水样的发酵结果查表2,10、1、10-1、10-2ml水样的发酵结果查表3,即得大肠菌群数。
 
五、思考题 
1.大肠菌群的定义是什么?
2.假如水中有大量的致病菌——霍乱弧菌,用多管发酵技术检查大肠菌群,能否得到阴性结果?为什么?
3.EMB培养基含有哪几种主要成分?在检查大肠菌群时,各起什么作用?
4.经检查,水样是否合乎饮用标准?

 

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