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微生物的保存技术(3)



录入时间:2011-6-28 14:25:07 来源:互联网

 
4    传代培养保存法 
 
        尽管与上述方法相比,用传代培养保存法保存微生物的时间较短,且会使微生物在反复传代和适应的过程中发生变异,但由于其简便易行,加之一些不耐冷冻和干燥处理的微生物还需要用该法保存,所以, 传代培养保存法是所有使用微生物的单位都要采用的基本保存法。目前必须依靠传代培养保存的微生物仍为数众多。传代培养保存法主要是保存生活态的微生物,它又分为连续用培养基传代和连续用活宿主传代。斜面保存法和矿物油保存法是传代培养保存的两种最常用的方法。 
 
4.1   斜面保存法 
 
        斜面保存法是传代培养保存法的具体方法,其优点是简便,易于推广。但用该法保存微生物的时间不太长。由于在具体操作时需要多次传代,加之斜面培养基中又保持了一定的营养条件,因此,用这种方法保存的微生物还易产生变异。使用该方法保存微生物时,可将菌种接种在不同成分的斜面培养基上,培养至菌种充分生长后,放 4℃冰箱中保存。每隔一定时间进行接种培养后再行保存,如此连续不断。一般细菌、酵母、放线菌和霉菌均可用此法保存。
 
4.2   矿物油保存法 
 
        矿物油保存法是传代培养保存法的变相方法,也较简单,且保存时间可达 1年以上。矿物油保存法,即是将接种在斜面培养基的细菌经过培养后,加入灭菌的石蜡油并浸盖住整个斜面( 覆盖的深度为 2cm ) ,使之与空气隔绝,以降低微生物的代谢率( Gherna   1981) ,再将浸盖有石蜡油的斜面培养菌种置于约 4℃或室温保存即可。复苏的方法与常规再培养的方法类似。尽管这种方法可使保存的细菌 3年内不死,但不适于微生物的长期保存, 因为每隔几年就必须复苏、鉴定和再贮存,从而耗费人力和物力。霉菌、酵母菌和放线菌可用该法保存,一些不适于冷冻干燥的微生物用该法保存也有效。 
 
5    砂土保存法 
 
        产芽孢的细菌或霉菌和放线菌的孢子均可用此法保存。具体操作如下: 
        用 60目和 120目筛除去砂和黄土中的大颗粒,分别用 10%盐酸浸泡 2~4小时,再用水洗至中性,烘干后按 2份砂:1份土的比例混匀,装入小试管中高压灭菌(至少 3次),并作无菌检查,确认无菌后备用。在培养好的斜面菌种中加入无菌水,做成细菌芽孢或霉菌和放线菌孢子悬液后,取出一 定量加入上述处理好的砂土管中,置真空干燥器内,用真空泵抽干后再将砂土管置入盛有氯化钙干燥剂的容器内,密封后低温保藏即可。芽孢杆菌、产孢子的霉菌以及放线菌可用该法保藏 1~10年.少数微生物,如放线菌和一些生活在土壤中的产芽孢细菌能抵抗正常的冷冻操作,并保持活力和基因的稳定性。以 0~-20℃保存在营养培养基中的培养物,其细胞可存活 2年, 但一般认为这种细胞会被所形成的冰晶伤害。
        对某些短期保存的微生物而言,低温保存不失 为一种廉价而有用的方法。室温干燥可使大量的微生物死亡(Gherna 1981) ,但有少数细菌能够抵抗脱水干燥并存活相当长的时间,产芽孢的细菌特别适用于这种贮存方法。干燥保存法通常将微生物细胞转种在一个灭菌的固体培养基上,然后在真空中脱水。土壤、纸张或陶制有孔培养基(Ceramic bead medium)常用于此类目的。
        还可先将细胞悬浮在明胶液内,再将这种明胶滴在真空中干燥。一旦脱水,细胞必须保存在干燥器内。如果再放到冰箱内保存,细菌的活力会保持得更长久些。用这种方法贮存的样品复苏后,要用营养培养基再水合和再次培养。该法常用于一些重要细菌属(如根瘤菌)的保存。
 

 

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