菌悬液的浓度要求的确是每毫升小于100cfu，但是最好在50到100cfu之间，小于50的话容易出现假阴性。

 

其实无菌方法验证中的菌悬液的制备也是依中国药典（2005年版二部）附录XI H无菌检查法中“培养基灵敏度检查”项下的方法，制备成小于100 CFU/ml的对照用菌液。所以无论你做什么，菌悬液的制备方法都是一样的。

 

具体方法就是，先把生孢梭菌在硫乙醇中培养24小时，然后吸取1毫升培养液用生理盐水进行10倍稀释，我的经验是，稀释到10的-7次方就是在100cfu以下了，然后取至少200ml的硫乙醇酸盐培养基到试管里（要求无菌），然后接种1ml制备好的菌悬液到硫乙醇试管里，在32.5度下培养18h，然后开始计数。生孢梭菌在液体的硫乙醇里会长成梭子一样的单个菌落，这时拿的时候千万不要震动，然后开始计数（一个单独的“梭子”计一个菌落）。

 

注：如果培养时间太长会产生浑浊，不便于计数。如果震动试管也会浑浊。硫乙醇的量尽量大一点，这样便于计数。