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细菌培养检测技术(1)



录入时间:2011-6-1 10:19:32 来源:丁香园


 细菌的培养技术是微生物实验中基本技术之一。大多数细菌均可用人工方法培养,只有将细菌培养出来才能对它进行研究和鉴定
  一.培养基的种类
  培养基(culture medium)是细菌生长繁殖所需要的各种营养物质的人工制品。适宜的培养基能使细菌在体外迅速生长繁殖,便于对细菌进行分离和鉴别。可分为基础培养基、营养培养基、选择培养基、鉴别培养基、厌氧菌用培养基和特殊培养基。
  (一)基础培养基
  只含有细菌生长所需的最基本营养成分,应用最广泛,为制备多种培养基的基础,常见的有肉汤培养基、琼脂培养基。
  (二)营养培养基
  在基础培养基中加入葡萄糖、血液、血清、腹水或酵母浸膏等有机物,可供营养要求较高的细菌生长需要或增菌用。如结核分枝杆菌培养基中添加鸡蛋、马铃薯、甘油等。
  (三)选择培养基
  利用不同种类细菌对化学物质的敏感性不同而制成,使分离菌大量繁殖而抑制其它细菌生长的培养基。培养基中含有的抑制剂能抑制非目的菌生长或使其生长不佳,有利于目的菌的检出和识别。选择培养基多为固体平板,用于从标本中分离某些特定的细菌。
  (四)鉴别培养基
  培养基中加有某些特定成分,如糖、醇类和指示剂等,用于检查细菌的各种生化反应,以资鉴别和鉴定细菌。
  (五)厌氧菌用培养基
  专性厌氧菌须在无氧条件下才能生长,故需在培养基中加入半胱氨酸、硫乙醇酸钠等还原剂,降低培养基中氧化还原电势,并应与外界空气隔绝,使培养基本身为无氧的环境。
  (六)特殊培养基
  为某些需要在特殊条件下才能生长的细菌培养之用。如高渗盐增菌培养基、高渗糖增菌培养基、改良 Kagan氏培养基等。
  二.培养基的制备
  制备一般培养基的主要过程基本相似,包括调配、溶化、调整 pH、过滤、分装、灭菌及检定和保存。
  三.细菌检验室的注意事项及无菌技术
  细菌培养必须随时为防止污染和病原菌的扩散而进行操作,即无菌操作。细菌检验室的注意事项如下:
  1.细菌的培养应在接种罩或无菌室内进行。有条件的实验室可在超净工作台内进行。
  2.用接种环分离和移种细菌时,用前用后均需灭菌处理。一般采用火焰灭菌法。
  3.从培养瓶或试管培养物中取标本或移种时,在打开瓶口、管口或关闭前,均要在火焰上通过2~3次。切不可将含菌材料污染台面和其他物体。
  4.如不慎将试管等打破造成菌液污染时,不要惊慌,应立即报告负责人,然后用3%来苏或5%石炭酸处理污染台面或地面,至少浸泡30分种。
  5.工作完毕后,用紫外光灯照射30分钟,或用3%来苏擦拭台面,并清洗双手。
   四、接种环和接种针使用
  接种环和接种针由三部分组成,即环(针)部分、金属柄部分和绝热柄部分。接种环和接种针通常选用电热(镍)丝,环的直径随使用目的而不同,一般多为2~4mm,环和针的长度为40~50mm。
  接种环(针)使用前后均应进行灭菌处理,将接种环(针)末端直立火焰中,烧红镍丝部分,再使接种环(针)金属柄旋转通过火焰3次灭菌,冷却后用以取菌或待试标本。使用接种环(针)完毕后立即将染菌的镍丝部分于还原焰(内焰)中加热,烤干环(针)端附着的细菌或标本,以免环(针)上残余的细菌或标本因突受高热,爆烈四溅,而污染环境和导致传染危险。然后再移于氧化焰(外焰)中烧红灭菌,最后将金属柄部分往复在火焰中通过3次。用完后的接种环(针),应立即搁置于架上,切勿随手弃置,以免灼焦台面或其他物件。
 

 

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