二、今后开展厌氧菌检验工作的建议

 

       (一)实验室分级[6]：

 

       参照目前国际上临床厌氧菌检验发展的现状结合我国的实际情况(临床实验室人员素质和设备条件)，建议按厌氧菌检验内容将实验室划分为 I、Ⅱ 、Ⅲ级。

 

       I级实验室检验内容：

       1．设备条件：

 

       (1) 厌氧罐或厌氧袋。

 

       (2) 运送培养基，常用高层半固体培养基、庖肉培养基(也可作为培养厌氧菌的培养基)。

 

       (3) 非选择性分离培养基：常用含5％羊血布氏琼脂或心脑浸汁琼脂平板(BA)，厌氧菌和兼性厌氧菌都能生长，补加氯化血红素，终浓度为5μg／ml．VITEKll0μg／m1有利于类杆菌和产黑色素杆菌生长；硫乙醇酸钠肉汤增菌培养基和厌氧菌血液培养瓶等。 (4) 选择性分离培养基：常用羊血苯乙醇(PEA)琼脂平板，在厌氧菌基础培养基中加入O．25g／100m!苯乙醇，可抑制变形杆菌蔓延生长和革兰阴性兼性厌氧菌生长，革兰阳性和革兰阴性的专性厌氧菌生长好，但革兰阳性兼性厌氧球菌也生长；类杆菌—胆汁－七叶甙（BBE）琼脂平板，在100ml厌氧菌基础培养基中含有七叶甙0．1g，牛胆汁2g，氯化血红素lmg，庆大霉素10mg，枸橼酸铁铵0．05g，脆弱拟杆菌群生长良好，形成暗的其周围有棕色或黑色晕环的菌落；卡那霉素－万古霉素冻融血琼脂平板(KVLB)在厌氧菌基础培养基中补加冻溶血5％一10％，卡那霉素50一l00μg／ml，万古霉素7．5μg／ml，VITEK l10μg／ml，有利于产黑色素杆菌的生产，以提早24小时出现色素。 

 

       (5) 灭滴灵纸片：5μg／片，有抑菌环即为敏感，绝大多数专性厌氧菌对灭滴灵敏感，兼性厌氧菌耐药，如果周围出现抑菌环，表明有专性厌氧菌存在。Ⅰ级水平实验室可根据本室情况，将标本接种在非选择和选择培养基上，贴l张灭滴灵纸片，35℃，培养48小时。灭滴灵纸片周围出现抑菌环说明有厌氧菌生长(极少数厌氧菌种耐药)，在其周围挑取不同的菌落做耐氧试验，分纯细菌做次代培养。

 

       2．鉴定内容：

 

 

       I级实验室只要求用简单的条件做厌氧菌培养，结合革兰染色、细菌形态和菌落特点做到初步推断厌氧群或属。见表l。

 

       表l I级水平实验室厌氧菌鉴定表

 

 

Ⅱ级实验室检验内容：

 

       Ⅱ级实验室除使用I级实验室的设备外，还应进行厌氧菌分群和某些种的鉴定。根据菌落和菌体形态、革兰染色，对含一定量抗生素纸片的敏感性(包括卡那 霉素纸片 lmg／片，万古霉素纸片5μg／片，多粘菌素E纸片10μg／片)。厌氧菌纯培养抑菌环大于等于10mm为敏感。靛基质、硝酸盐纸片、触酶等简便的试验推断厌氧菌群、属和菌株的种名。见表2。

       表2 Ⅱ级水平实验室革兰阴性厌氧菌群、属、种鉴定