布鲁氏菌检验
 Examination of Brucella

一、布鲁氏菌与布鲁氏菌病

布鲁氏菌(Brucella)是人兽共患的布鲁氏菌病病原体，牛、羊、猪等动物最易感染。我国流行的主要是羊、牛(马耳他)、猪三种布鲁氏菌，其中以羊布鲁氏菌病最为多见。

该细菌主要感染怀孕动物，侵入生殖器官和网状内皮系统，并感染胚胎和胎儿，多导致胎儿死亡并流产；公畜主要表现为睾丸炎。人患病主要是由畜传染，人与人之间传染机会极少，感染途径主要是通过皮肤、消化道、呼吸道、眼结膜和生殖器官。人感染后潜伏期2～3周，由于本菌具有荚膜，能抵抗吞噬细胞的吞噬，并能在该细胞内增殖，反复出现菌血症，病人出现发热、无力等症状，且呈波浪式发热，故在临床上称为波浪热。

        人类接触带菌动物或食用病畜及其乳制品，均可被感染。布鲁氏菌病最危险之点是患畜几乎不表现症状，但能通过分泌物和排泄物(乳、精子、阴道分泌物、粪、尿)不断向外排菌，待别是随流产胎儿、胎衣和羊水排出大量病原菌，成为最危险的传染源。本菌在自然界中抵抗力较强，在病畜脏器和分泌物中，一般能存活4个月左右，在食品中约能生存2个月。在水、土、粪、尿中存活3个月，在皮毛上存活1～4个月，在冻肉中存活2～7周，在乳中存活10天至1年。对低温的抵抗力也强，对热和消毒剂抵抗力弱。对链霉素、氯霉素和四环素等均敏感。

nBrucella  is named after Sir David Bruce who, in 1886, first isolated the organism from the spleen of a soldier at post-mortem (尸检)with what was then called Malta fever.

nThe genus Brucella  currently contains six species : B. melitensis, B. abortus, B. canis, B. ovis, B. suis and B. neotomae, which vary in their ability to infect host animals.

nB. abortus primarily infects cattle but is transmitted to buffaloes, camels, deer, dogs, horses, sheep and man.

nB. melitensis causes a highly contagious disease in sheep and goats although cattle can be infected. It is the most important species in human infection.

nsix species of Brucella：

nB. suis covers a wider host range than most other Brucella  species.This species has 5 biovars. All biovars can be transmitted to man  with the possible exception of biovar 2.

nB. canis causes epididymo-orchitis in the male dog and abortion and metritis in the bitch. It has not been reported in other animal species except man.

nB. ovis is responsible for epididymitis in rams and occasionally abortion in ewes, but does not infect other animals or man.

nB. neotomae is only known to infect the desert wood rat (沙林鼠)under natural conditions, and no other cases have been reported.

图：Brucellosis, Hygromas(水囊瘤) on the knee joints. This condition may be a sequel to Brucella abortus infection.布鲁氏菌病引起的流产

 

二、生物学特性

(一)形态染色特性

     布鲁氏菌初分离时为微小球杆菌，继代后，牛和猪布鲁氏菌可逐渐变为杆状，羊布鲁氏菌仍为小球杆状。平均大小为0.6～1.5μm ×0.5～0.7μm。革兰氏染色阴性。不形成芽孢，无鞭毛，无动力。常单个存在。光滑型菌有荚膜。可被所有碱性染料着色，不呈两极浓染。柯氏染色法(沙黄与孔雀绿对染)染色，本菌为鲜红色，其它杂菌被染成绿色。

 (二)培养特性

n专性需氧，但许多菌株初次分离时需5% ～10%的CO2环境。适宜温度为35～38℃，适宜pH为6.6～7.4。布鲁氏菌的培养特点是生长缓慢，尤其是新分离株初次分离时在48h前罕见菌落形成，往往需要5～10d甚至20～30d。传代适应后48h可见生长。

n对营养要求严格，需某些氨基酸、血清、血液或组织浸液。血清葡萄糖肉汤和血清葡萄糖琼脂可支持所有种和大多数菌株生长。在肉肝汤中一般需2～3d才可见生长。肉汤轻微浑浊，无菌膜。1周后产生灰白色粘稠沉淀物。老龄培养物中有时可见菌环。

n在血清肝汤琼脂上2～3d 后形成湿润、闪光、无色、圆形、表面隆起、边缘整齐的小菌落。在血液肝汤琼脂上菌落灰白，不溶血。在高层血清琼脂培养3～6d后，牛型及绵羊型于琼脂表面0.5cm处呈带状生长。而在马铃薯斜面上本菌生长良好，2～3d后长出微棕黄色菌苔，色素溶于基质。

 (三)生化特性

多数菌株可分解葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖等，但分解能力低，产酸少，很难检测。本菌不液化明胶；不产生靛基质；不凝固牛乳；能还原硝酸盐为亚硝酸盐；接触酶阳性；MR试验和V-P试验阴性；H₂S试验不定。

(四)血清学特性

•本菌抗原结构非常复杂，就目前所知，布鲁氏菌有表面抗原(A、M、R)、亚表面抗原和深部抗原3类。

n1. A、M抗原   光滑型菌株的表面抗原主要是A(流产型)和M(马耳他型)抗原，为细胞壁脂多糖的大分子复合物，既是这些细菌的凝集原，也是种和型鉴定的重要依据。流产布鲁氏菌A﹕M为20﹕1，马耳他布鲁氏菌为1﹕20，猪布鲁氏菌为4﹕1。

n2. R抗原   非光滑型菌株除A、M抗原外，均还具有R抗原，为细胞壁上低蛋白含量的脂多糖复合物。绝大多数非光滑型菌株的R抗原是相同的，其抗血清可与羊布鲁氏菌和犬布鲁氏菌发生凝集，而不与光滑型布鲁氏菌凝集。

 

三、检验

一) 检验程序     见《动物性食品检验学》第六章。

二) 细菌的分离培养与鉴定   首先要注意安全，防止人员感染和环境污染，其次要特别注意满足布鲁氏菌的营养要求。

1. 细菌的分离培养：SDA(血清葡萄糖琼脂)，对污染样品则接种在选择培养基(加有抗生素的SDA)上。也可将检样接种于含2%(W/V)柠檬酸钠和抗生素的SDB中，经37℃培养2～3d(必要时补充5～10%的CO2)后再于SDA上分离培养约6d，直到出现可见菌落。

2. 布鲁氏菌的鉴定分型：在必要时进行布鲁氏菌的鉴定分型。   常规方法有： CO₂需求的检查，H₂S产生量的测定，染料抑菌试验， A、M、R血清凝集试验， Tb噬菌体裂解试验。

 

三) 血清学检验

用血清学试验诊断人、畜布鲁氏菌病仍是当前主要手段。常用的方法有10多种，其中用于人布病诊断的主要有试管凝集试验、二巯基乙醇试管凝集试验、抗球蛋白试验和补体结合反应，用于动物诊断的主要方法是试管凝集试验、平板凝集试验、虎红平板凝集试验和琼脂扩散试验等。

n(1)平板凝集试验(Plate agglutination test, PAT)

n(2)虎红平板凝集试验(RBPT)

n(3)试管凝集试验(SAT)：

n(4)抗人免疫球蛋白试验(Coomb’s反应)

n(5)补体结合试验(Compliment fixation test, CFT)