产气荚膜梭菌及其检验
Examination of Clostridium perfringens

一、魏氏梭菌Clostridium welchii

魏氏梭菌又称产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens )，不但是人和动物创伤感染的重要病原菌，而且是一种比较常见的食物中毒致病菌。魏氏梭菌食物中毒多发生在炎热的夏秋季节，中毒食物以鱼、肉及其制品为多见。A型菌引起的中毒，主要表现为急性胃肠炎，有严重水样腹泻和下腹部痉挛，多无呕吐、发热等其它特征。C型魏氏梭菌引起的食物中毒症状较严重，主要表现为严重的下腹部疼痛，重度腹泻，便中带有血液、粘液甚至粘膜碎片，并伴有呕吐，严重者发生暴发性肠毒血症，可引起死亡。

Clostridium perfringens is an anaerobic, Gram-positive, sporeforming rod (anaerobic means unable to grow in the presence of free oxygen). It is widely distributed in the environment and frequently occurs in the intestines of humans and many domestic and feral animals. Spores of the organism persist in soil, sediments, and areas subject to human or animal fecal pollution. Perfringens food poisoning is the term used to describe the common foodborne illness caused by C. perfringens. A more serious but rare illness is also caused by ingesting food contaminated with Type C strains. The latter illness is known as enteritis necroticans or pig-bel disease.

一)形态染色特性

革兰氏阳性粗大杆菌，两端钝圆，大小为1～2×2～10μm。陈旧培养物中可变为阴性。常单在或成双，偶有短链状排列。在含活体内或含有体液的培养基中可形成荚膜。很少形成芽孢，芽孢不比菌体大。无鞭毛，无动力。

二)培养特性

厌氧但不严格。在葡萄糖血琼脂上形成勋章样的大菌落，菌落周围有溶血，有时为双溶血环，外层不完全溶血，内层溶血完全，但在马血平板上表现不典型；菌落颜色略带灰黄色至浅灰褐色，与空气接触30min后，有时可变为灰绿甚至鲜绿色，这是本菌的特征之一；偶尔可见较小的白色菌落。在SPS琼脂上菌落呈黑色。在普通琼脂上培养24h后，菌落直径可达2～4mm，凸起，表面光滑，半透明，正圆形。本菌的另一个显著特征是可发酵牛乳并出现“暴烈发酵”现象。生长和繁殖速度很快，适宜条件下增殖1代只需8min。生长的温度范围为15～55℃，最适43～47℃。最适pH为7.0～7.2(范围4.9～8.3)。

三)生化特性

                   表 魏氏梭菌的主要生化特性                  

 

四)毒素特性

各型魏氏梭菌可产生12外毒素(包括5种酶)：α、β、γ、δ、ε、η、θ、ι、κ、λ、μ和ν，其中4种(α、β、ε、ι)是主要毒素。根据所产毒素种类，可将本菌分为A、B、C、D、E等 5个型(表5－31)。 除此之外，魏氏梭菌还可产生能引起食物中毒的肠毒素(主要是A型菌)。

                   表  魏氏梭菌的菌型与产毒素关系               

 

五)抵抗力   本菌繁殖体抵抗力不强，一般消毒药即可杀死，但芽孢抵抗力较强，可在土壤中长期存在，耐热，95℃、2.5h方可将其杀死。

二  检验

一)样品的收集与处理

二)常规检验方法，魏氏梭菌的常规检验重点包括细菌计数和确证试验。GB/T 4789.13-2003

1、活菌计数  2、确证试验

三)其它方法

1、肠毒素检测：1)反向间接血凝试验(RPHA)；2)凝胶沉淀试验(AGP)；3)豚鼠皮肤试验；4)结肠袢试验(90分钟法) 2、动物试验(用家兔和小白鼠做试验)：1)“泡沫肝”试验；2)小白鼠致死试验；3．中和试验